从肿瘤组织中提取蛋白质的操作步骤是什么

从肿瘤组织中提取蛋白质的基本步骤如下：

1. 组织处理：取得肿瘤组织后，需要尽快处理以防止蛋白质降解。在-80℃下快速冷冻的组织可以储存待用。

2. 制备细胞裂解液：根据需要提取的蛋白质类型，选择适当的细胞裂解液。通常，裂解液包含了能破坏细胞膜和核膜的化合物（如Triton X-100，NP-40等），并且还有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂以防止蛋白质降解和脱磷。

3. 组织均质化：将肿瘤组织与裂解液混合，使用组织均质器（例如用玻璃研磨棒或超声波均质器）充分打碎组织以释放蛋白质。

4. 离心：将均质化的液体在4℃下进行高速离心，通常是10000-14000g离心15-20分钟，以将细胞碎片和未打碎的组织颗粒沉淀。

5. 收集蛋白质：将离心后的上清液（含有蛋白质）转移到新的离心管中。

6. 蛋白质浓度测定：使用BCA蛋白质浓度测定试剂盒或Bradford方法测定蛋白质浓度。

这些步骤可能需要根据具体实验的需求进行调整。例如，如果需要研究的蛋白质是膜蛋白，可能需要使用含有更强烈的表面活性剂的裂解液来提高膜蛋白的提取效率。

从肿瘤组织中提取蛋白质的操作步骤如下：

1、配置裂解液：在裂解液中按要求加入磷酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂（购买的商业化抑制剂使用浓度请按说明书添加）。

2、提前预冷离心机。

3、组织裂解：将 30 mg 组织在 PBS 稍涮洗后，用吸水纸吸干水分，放入 1.5 ml 离心管，置于冰上，每管放入 2 颗研磨钢珠，加入裂解液，放入研磨仪研磨，直至看不到组织。

4、离心：离心机预冷（15000 rpm，4 ℃，10～15 min）。

5、取上清，长时间保存可放置 -80 ℃ 冰箱。

组织称重匀浆

步骤1. 每个EP管放入做多100 mg组织，按照100 mg/1 mL加入裂解液。

步骤2. 裂解液配方（50 μL：40 μL RIPA＋5 μL蛋白酶抑制剂＋5 μL磷酸酶抑制剂＋0.5 μL PMSF）。

步骤3. 2个50 mL烧杯，一个放生理盐水用于清洗匀浆器头；另一个放冰用于放盛有组织的EP管。每次匀浆2s（或者5-8s）

2. 裂解

步骤1. 4℃裂解30min。

步骤2. 离心机预冷（15000rpm，4℃，10-15min）。

步骤3. 取上清（约可获得800 μL）。

如果改天测蛋白浓度，将提取好的上清储存于-80℃。