从全血和体液中提取基因组DNA的操作步骤

提取DNA需要的仪器和试剂：

⑴ 1.5ml 离心管

⑵ 移液管: 1000μl, 200μl, 40μl 各一支和移液管尖头: 100-1000μl, 1-200μl 各一盒

⑶ 微型滤柱（备用）

⑷ 小型旋转混合器一台

⑸ 小型离心机: 可放入1.5ml 离心管和2ml收集管.

⑹ 恒温水浴

⑺ 电冰箱: -20℃, 4 ℃

⑻ 无水乙醇(自备)

⑼ 70% 乙醇(自备)

⑽ DNA提取试剂盒。内含: ⑴ 裂解液1 ⑵ 裂解液2 ⑶消化液 ⑷纯化液 ⑸弥散液 ⑹蛋白酶K ⑺ 带钩细玻棒一盒 ⑻ 微型滤柱若干。

一．从1ml全血或体液中提取DNA的步骤：

⑴ 裂解1： 取1ml全血，血桨，血清，淋巴细胞放入到1.5ml的离心管中，加入400μl裂解液1。上下翻转，使沉淀物分散，旋转脉动15秒后放入离心机中离心，离心速率为8000rpm，1min.。倒掉上层液，可见离心管底部有血色沉淀。重复此裂解步骤一次，这次是加入1ml裂解液1。 最后用移液管吸净所有上层液弃去, 以使离心管底部的血色沉淀不再残留有裂解液1。

⑵ 裂解2: 在上面离心管中加入1ml裂解液2。上下翻转，务必使沉淀物分散， 旋转脉动15秒后放入离心机中离心，8000rpm，1 min.。 倒掉上清液，可见离心管底部有微量淡红色沉淀。重复此裂解步骤一次，这次仍然是加入1ml裂解液2，最后用移液管吸净所有上清液弃去，以使离心管底部的灰白色沉淀不再残留有裂解液2。

⑶ 消化： 吸取蛋白酶K 10μl ( = 0.2mg )加入到上面的离心管中，用移液管尖头反复吹打， 使蛋白酶K与沉淀物均匀接触后， 加入320μl消化液，上下翻转离心管， 务必使沉淀物分散于消化液中。放入58℃水浴中消化15分钟。最后可见澄明的消化液体。

⑷ 纯化：在上面的消化液体中加入110μl纯化液， 上下翻转离心管几下后， 离心，速率为15000rpm, 1min， 把上清液吸出放入到装有1000μl无水乙醇的1.5ml离心管中，轻轻上下翻转10次， 可见絮状DNA析出。用带钩的玻璃棒挑起絮状DNA放入到100μl 70%乙醇中耒回漂洗20次，钩出DNA，在空气中凉干一下后放入到100μl弥散液中。把DNA弥散液保存于4℃，过夜， 使之充分弥散后使用。提取完毕。

如要立即用此DNA做PCR实验，把DNA弥散液放在58 ℃水浴中，保温30分钟, 用手指拍打离心管子，使DNA弥散后使用。提取完毕

⑸ 收集：(在DNA极少量， 不能用带钩玻璃棒挑起的情况下) 把有絮状DNA的溶液倒入微型柱过滤器(包括滤柱和收集管)中， 滤器放入离心机内，离心: 8000rpm , 1 min.. DNA便附着在滤漠上，弃去滤液，把滤柱放回收集管上。

⑹ 吸取200μl 70%乙醇于滤柱内，离心8000rpm ，1min， 弃去滤液。把滤柱放回收集管上，再心 15000rpm ，1 min.使吸附在滤膜上的DNA不再附有乙醇。

⑺ 回收DNA: 把上面附着DNA的滤柱放入一个干净的1.5ml 离心管中。 吸取100μl 已温热到58 ℃的弥散液，轻轻放入滤膜的表面， 保温58 ℃静置10分钟。 离心 8000rpm ，1 min.，DNA弥散液便滤入到干净的1.5ml离心管内。此DNA弥散液可即时作PCR实验用。提取完毕。

附：如从2ml全血中提出取DNA，方法和步骤与从1ml全血一样，只是在步骤⑷ 纯化之前，把两个1ml全血的消化液管内容物合并后，加入220μl纯化液，上下翻转离心管几下后， 离心，速率为15000rpm, 1min， 把上清液吸出放入到装有1800μl无水乙醇的2ml管中，轻轻上下翻转10次， 可见絮状DNA析出。用带钩的玻璃棒挑起絮状DNA放入到200μl 70%乙醇中耒回漂洗20次，钩出DNA，在空气中凉干一下后放入到100μl弥散液中。把DNA弥散液保存于4 ℃，过夜， 使之充分弥散后使用。提取完毕。

如要立即用此DNA做PCR实验，把DNA弥散液放在58 ℃水浴中，保温30分钟, 用手指拍打离心管子，使DNA弥散后使用。提取完毕。

二．从200μl全血或体液中提取基因组DNA的操作步骤

⑴裂解1： 取200μl全血，血桨，血清或淋巴细胞放入到1.5ml的离心管中，加入200μl的裂解液1。上下翻转，使沉淀物分散，旋转脉动15秒后放入离心机中离心，离心速率为14000rpm，1 min.。倒掉上层液，可见离心管底部有微量沉淀。重复此裂解步骤一次，这次也是加200μl裂解液1。最后用移液管吸净所有上清液弃去, 以使离心管底部的沉淀不再残留有裂解液1。

⑵裂解2: 在上面离心管中加入200μl的裂解液2。上下翻转，务必使沉淀物分散，旋转脉动15秒后放入离心机中离心，14000rpm，1 min.。 倒掉上清液，重复此裂解步骤一次，这次仍然是加入200μl裂解液2，最后用移液管吸净所有上清液弃去，以使离心管底部的沉淀不再残留有裂解液2。

⑶ 消化：吸取蛋白酶K 5μl ( = 0.1mg )加入到上面的离心管中，用移液管尖头反复吹打， 使蛋白酶K与沉淀物均匀接触后， 加入85μl消化液，上下翻转离心管， 务必使沉淀物分散于消化液中。放入到58℃水浴中消化15分钟。最后可见澄明的消化液体。

⑷ 纯化：在上面的消化液体中加入30μl纯化液， 上下翻转离心管几下后， 离心，速率为14000rpm, 1min， 把上清液吸出放入到装有240μl无水乙醇的1.5ml离心管中，轻轻上下翻转10次， 可见溶液稍有混浊就是絮状DNA析出。

⑸ 收集：把有絮状DNA的溶液倒入微型柱过滤器(包括滤柱和收集管)中， 滤器放入离心机内离心，离心速率 8000rpm , 1 min.. DNA便附着在滤漠上，弃去滤液，把柱滤器放回收集管上。

⑹ 吸取50μl 70%乙醇于滤柱内，离心800rpm，1min，弃去滤液。把滤柱放回收集管上，再离心 15000rpm ，1 min.. 使吸附在滤膜上的DNA不再附有乙醇。

⑺ 回收DNA: 把上面附着DNA的滤柱放入一个干净的1.5ml 离心管中。 吸取50μl 已温热到58 ℃的弥散液，轻轻放入滤膜的表面， 滤器在水浴58℃保温 10分钟。 离心 8000rpm ，1 min.，DNA弥散液便滤入到干净的1.5ml 离心管内。此DNA弥散液可即时作PCR实验用。提取完毕。

附：从100μl全血或体液中提取基因组DNA

⑴裂解1： 取100μl全血，血桨，血清或淋巴细胞放入到1.5ml的离心管中，加入100μl的裂解液1。上下翻转，使沉淀物分散，旋转脉动15秒后放入离心机中离心，离心速率为14000rpm，1 min.。倒掉上层液，可见离心管底部有微量沉淀。重复此裂解步骤一次，这次也是加100μl裂解液1。最后用移液管吸净所有上清液弃去, 以使离心管底部的沉淀不再残留有裂解液1。

⑵裂解2: 在上面离心管中加入100μl的裂解液2。上下翻转，务必使沉淀物分散，旋转脉动15秒后放入离心机中离心，14000rpm，1 min.。 倒掉上清液，重复此裂解步骤一次，这次仍然是加入100μl裂解液2，最后用移液管吸净所有上清液弃去，以使离心管底部的沉淀不再残留有裂解液2。