Trizol法高产量、快速提取全血基因组DNA一例报道——呵呵

因为以前只是用Trizol提取过培养细胞的RNA，加入氯仿后只需吹打即可，没有提全血RNA的经验。前几天要提全血拉，我看步骤说明里面，“加氯仿后剧烈震荡”，因为偶力气大，生怕把mRNA弄断了，就来了个不剧烈的震荡。跑完电泳一看，基因组DNA污染；RNA只见18S、28S条带，均模糊、断裂。

我以为是Trizol过期了（上海生工产品），一边订新的，一边好奇，把全血改为400ul，把Trizol改为600ul（原来的量分别是200ul、800ul），剧烈震荡改为颠倒混匀，结果——加入异丙醇以后立即出现大量云雾状沉淀，电泳证实几乎没有RNA存在，DNA条带亮的刺眼。

这样的DNA里面肯定有组蛋白污染拉，偶就稀释到400ul（没法子，这样的DNA实在太稠了，呵呵），跑了个内参（GADP），PCR结果也是亮的刺眼，嘿嘿。用同样的Trizol和200ul、800ul体积重新提取RNA，这次注意“剧烈震荡”1分钟，结果：RNA条带18S、28S完整，5S不明显，DNA未见。

讨论：

看来Trizol提取全血RNA的时候，加氯仿后剧烈震荡是非常必要的，非此不足以去除组蛋白和与之结合的DNA成分。反过来，如果不剧烈震荡，就可以提出高产量的基因组DNA，虽然有组蛋白污染，不过跑PCR还是不受影响的。除了GADP外，我另外又试过十几种引物，结果都很好。

如果用试剂盒提全血DNA，那当然好，前提是你足够有钱。我用酚/氯仿抽提全血DNA，产量一直比较小，试过纯水、RBC裂解液裂解RBC，都不是很理想，WBC损失很大，2ml的产量比不过Trizol法200ul的产量。我最近要摸大量的PCR的条件，所以极郁闷，老是要去提新的对照DNA，烦S了。这次发现了Trizol法的捷径，偶就爽歪了，嘿嘿。

此外，常规提取DNA的时候，蛋白酶K一般要56度3-4小时，想必大家都给它耗过吧。用Trizol提取DNA就没这个烦人的步骤了，整个过程不到1小时。步骤如下：

1. 全血400ul、Trizol 600ul颠倒混匀，静置5min

2. 加氯仿颠倒混匀，静置5min

3. 10000rpm，10min

4. 取上清，加600ul异丙醇，立即见大量云雾状沉淀

5. 10000rpm，5min

6. 去上清，沉淀用70%酒精洗一次，不需离心，小心吸弃上清即可，因为沉淀量很大，而且很结实，轻易不碎

7. 干燥5min

8. TE 300-400ul溶解沉淀，分装冻存

结论：

如果你不是很有钱，如果你的Trizol 是国产的，而且有点过期，如果你急需提全血DNA，用量大，如果你不是很在乎组蛋白。。。你就请试试这法子吧！其实，如果把DNA接着用蛋白酶K消化，应该也可以得到高产量、高质量的DNA，只是我没有试过