求助|肿瘤浸润淋巴细胞提取

从乳腺癌实体组织中提取肿瘤浸润淋巴细胞，建议用percoll40/80浓度试试。

一般是用胰蛋白酶加edta进行消化，脂肪可以用离心和滤网去除

提取肿瘤浸润淋巴细胞和脂肪组织处理是乳腺癌研究中的常见步骤之一。以下是一些一般的步骤和建议。

1. 提取肿瘤浸润淋巴细胞：

- 准备含有肿瘤组织的样本。确保使用新鲜的组织样本。

- 将组织切割成小块，最好是使用组织切片机进行均匀切割。

- 使用适当的细胞分离缓冲液（例如PBS）洗涤组织块，以去除表面附着的血液和细胞碎片。

- 准备离心梯度液（如Percoll）。浓度和层次可根据实验需要进行优化。

- 将组织块轻轻地放置在离心梯度液中，并进行离心，以分离出肿瘤浸润淋巴细胞。

- 通过离心分离，肿瘤浸润淋巴细胞可能会沉淀在某个特定的梯度浓度层次中。收集该层次的细胞。

2. 去除脂肪组织：

- 如果需要去除脂肪组织，可以尝试以下方法：

- 细胞过滤：使用细胞滤网（如70 μm滤网）将组织悬液过滤，以去除较大的脂肪组织碎片。

- 富集单细胞：使用离心梯度液（如Percoll）分离富含单个细胞的层次，并收集该层次中的细胞。脂肪组织可能会留在上层，而单细胞会分布在下层。

- 细胞洗涤：对于富含脂肪的细胞悬液，尝试多次洗涤步骤，使用适当的细胞分离缓冲液洗涤，以去除脂肪残留。

3. 制备单细胞悬液：

- 将收集到的组织样本（包括肿瘤浸润淋巴细胞）进行酶消化，以获得单细胞悬液。

- 常用的酶消化混合物包括胰蛋白酶、胶原酶和DNA酶。不同实验室和研究项目可能会使用不同的酶消化组合，所以最好咨询你所在实验室的研究人员，以获取更具体的建议。

- 通常，酶消化的时间可根据具体的酶和样本类型而有所不同，一般在30分钟到1小时之间。