DxkT3210
最近在做载药,需要提取肿瘤细胞膜,但是尝试了好几篇文献的做法,都提不出来,实验现象与文献中描述的不同。离心时也还有很多粘稠状的物质,都连在一起。求各位前辈指教,有没有靠谱一点的方法或者文献能够提取出细胞膜呢?拜托了~
dxy_yy70seo8
你好,请问你现在找到可行的方法了吗
罗曼蒂克温
同学,你做成功没有啊,可否与大家分享一下经验,非常感谢!
龙大人驾到
我觉得可以用如下方法
超声破碎法利用超声波的作用将细胞破碎,并分离膜和质膜内的物质。具体操作如下:
(1) 用PBS或其他缓冲液洗涤细胞,收集细胞后用PBS或1 mM EDTA溶液处理,使细胞变得易于破坏。
(2) 将细胞沉淀洗涤后加入10 mM Hepes缓冲液,pH7.5,含有0.25 M 蔗糖和1 mM MgCl2,用超声波处理5-10次,每次30秒,不同功率需要自行测试。
(3) 将破碎后的混合物进行离心,分离上清液和核酸。
(4) 将离心沉淀用PBS缓冲液再离心一次,分离出细胞膜。
loveliufudan
提取细胞膜通常是一个比较复杂的过程,需要综合运用不同的技术和试剂来实现。以下是一些可能有助于提取肿瘤细胞膜的方法和技术:
化学法: 化学方法可以破坏细胞膜的脂质双层,从而释放细胞质和核质,使细胞膜与其他细胞组分分离。例如,可以使用磷脂酶 A2 和 Triton X-100 来溶解细胞膜。
酶解法: 酶解法可以破坏蛋白质和糖类在细胞膜上的键合,从而释放出细胞膜。例如,可以使用胰酶和卵白蛋白来酶解肿瘤细胞膜。
超声波破碎法: 超声波破碎法可以通过超声波振荡的作用,使细胞膜断裂并释放出细胞质和核质。此方法适用于大量细胞的提取。
钙离子沉淀法: 钙离子沉淀法是一种利用钙离子沉淀细胞膜的方法。该方法可以通过逐步加入氯化钙来诱导细胞膜凝聚并沉淀,最终分离出细胞膜。
亲和纯化法: 亲和纯化法可以利用具有亲和性的化合物来特异性地结合目标蛋白质,从而纯化细胞膜。例如,可以使用亲和性为细胞膜蛋白的抗体来纯化肿瘤细胞膜。
毛利小五郎的徒弟
可以参考中科院的纳米材料辅助肿瘤细胞膜的提取方式。