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如果你是测核酸浓度的话,要看一下OD260/OD280的比值,以及是否有杂峰,浓度要根据你做的实验来判定,不要过低就行
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在确定好的OD值时,以下几个方面需要考虑:
1. 波长:确定你所测量的光的波长。不同的物质在不同波长下的吸收能力不同。
2. 参考样品:使用一个已知浓度的参考样品作为基准,可以比较其他样品的光密度值。
3. 光路:确保光线能够穿过溶液,以便测量吸光度。使用光路校准来排除任何干扰。
4. 温度:温度对溶液的光密度值可能产生影响,所以在测量过程中要注意控制温度。
至于什么样的光密度值被认为是好的,这取决于具体的应用和实验条件。在某些情况下,较高的光密度值可能表示更高的浓度或更强的吸光度,而在其他情况下,较低的光密度值可能更为理想。最佳的光密度值需要结合实验目的和参考样品的浓度来确定。
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1、根据OD值计算核酸浓度
因为核酸分子里含有嘌呤和嘧啶,它们具有共轭双键,在波长260 nm处有最大吸收峰,所以核酸的最大吸收波长是260 nm。蛋白质的最大吸收波长是280 nm。
在波长260 nm处测定的OD值记为OD 260 。如果样本是纯净的,OD 260值可以用于计算核酸样品的浓度。1 OD 260相当于50 μg/mL双链DNA,或者30 μg/mL(40 μg/mL)单链DNA(RNA),或者20 μg/mL寡核苷酸。
2、根据OD值评估核酸纯度
在波长260 nm和280 nm 处测定的OD值的比值记为OD 260/280 。它可以用于评估核酸样品的纯度。纯DNA的OD 260/280比值为1.8;纯RNA的OD 260/280比值为2.0。
通常情况下,提取之后经过适当纯化、纯度较高的DNA样品,OD 260/280在1.6-1.8之间,能够满足大多数分子生物学实验的要求;经过纯化、纯度较高的RNA样品,OD 260/280在1.9-2.0之间,也能够满足大多数分子生物学实验的要求。
如果DNA样品的OD 260/280比值高于1.8,表明该DNA样品中有RNA残留;低于1.6,表明有蛋白质和/或苯酚残留(也称为污染)。如果RNA样品的OD 260/280比值高于2.0,表明有异硫氰酸胍残留;低于1.9,表明有蛋白质和/或苯酚残留。
另外,OD 230用于评估样品中是否存在碳水化合物、多肽、苯酚等污染物。较纯净的核酸样品,OD 260 /230比值大于2.0
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