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细胞实验问题求助??

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lyang556

养的HUVEC细胞用FDA/PI染色,同一个细胞,既能显示绿色荧光,也能显示红色荧光,不知道什么原因?

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3 个回答

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huarenqiang5

有帮助

可能是pi染色时间太长出现的假阳性,建议减小pi浓度或减少pi染色时间。

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loveliufudan

有帮助

可能有以下几个原因:

1. 细胞状态:FDA和PI都是常用的细胞活力染料,但它们的工作原理不同。FDA能够进入活跃的细胞并被细胞内酯酶水解,生成具有绿色荧光的荧光素。而PI主要用于染色已经损伤或死亡的细胞,它能够穿透细胞膜并与细胞核内的DNA结合,发出红色荧光。因此,如果在FDA/PI染色过程中,某些细胞同时存在活跃的细胞和已经受损或死亡的细胞,这些细胞可能会同时显示绿色和红色荧光。

2. 染色条件和时间:染色条件和时间的不同也可能导致细胞同时显示绿色和红色荧光。如果FDA和PI的染色时间过短或浓度过低,可能导致染色的不充分,使得细胞同时显示两种荧光信号。

3. 染色剂交叉作用:尽管FDA和PI通常用于分别染色活跃细胞和已经死亡的细胞,但有时这两种染色剂可能会发生交叉作用。染色剂之间的相互作用可能导致细胞同时显示绿色和红色荧光。

为了更准确地评估细胞的活力和状态,建议尝试使用单独的荧光染料对HUVEC细胞进行染色,例如只使用FDA进行活细胞染色或只使用PI进行死细胞染色,以区分细胞的不同状态。另外,确保在染色过程中遵循正确的染色方案和操作步骤,以获得准确的染色结果。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

考虑是存在自发荧光,建议可以先封闭一下

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