【求助】角质形成细胞实验中遇到的问题。

我在养角质形成细胞中，从皮肤上分下来细胞后，计数后，看来挺多的，可养一段时间后，为什么在测指标时细胞数量总是不够？中间有的细胞为什么贴壁不好？
请问在养人角质形成细胞的各位园友，为什么角质形成细胞总是长不好，看来好像就是不长，一直就是那样子，是不是细胞密度太小了。如果要是测胞内钙离子，细胞膜上的ATP酶活性及膜流动性，可否直接从皮肤上分离下来细胞后，直接给药测指标。不要让细胞贴壁，这样测有无影响？
有没有人测过人角质细胞骨架。效果明显马？

角质形成细胞，你指的keratinocyte吗？
用的什么培养液？ 我一般用 Invitrogen的 K-SFM，加 10 ng/m EGF,
在原代培养的 时候，可以加少量血清，有利于贴壁，但血清同时容易促角化，所以原代第二天要更换回无血清的K-SFM。

测ATP活性或膜流动性，没做过，不便多说。

细胞骨架，我们用F-actin做荧光。l

human 的 keratinocyte, 我一般用 Invitrogen 的 Epilife Medium 加 Human Keratinocyte Growth Supplement (HKGS)。

角质细胞对钙浓度很敏感，如果太高，就会角化，停止生长。促进生长的最佳浓度是0.06mM。血清的钙离子浓度远超过0.06mM，所以尽量少用了。

原代细胞最好是从新生儿包皮分离出来的，我是用mitomycin处理过的NIH3T3做feeder layer, 然后用DMEM加10% Fetal Bovine Serum, 加 胆碱毒素，加表皮生长因子，加氢化可的松，来培养。