【求助】角质形成细胞实验中遇到的问题。
丁香园论坛
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我在养角质形成细胞中,从皮肤上分下来细胞后,计数后,看来挺多的,可养一段时间后,为什么在测指标时细胞数量总是不够?中间有的细胞为什么贴壁不好?
请问在养人角质形成细胞的各位园友,为什么角质形成细胞总是长不好,看来好像就是不长,一直就是那样子,是不是细胞密度太小了。如果要是测胞内钙离子,细胞膜上的ATP酶活性及膜流动性,可否直接从皮肤上分离下来细胞后,直接给药测指标。不要让细胞贴壁,这样测有无影响?
有没有人测过人角质细胞骨架。效果明显马?
请问在养人角质形成细胞的各位园友,为什么角质形成细胞总是长不好,看来好像就是不长,一直就是那样子,是不是细胞密度太小了。如果要是测胞内钙离子,细胞膜上的ATP酶活性及膜流动性,可否直接从皮肤上分离下来细胞后,直接给药测指标。不要让细胞贴壁,这样测有无影响?
有没有人测过人角质细胞骨架。效果明显马?
角质形成细胞,你指的keratinocyte吗?
用的什么培养液? 我一般用 Invitrogen的 K-SFM,加 10 ng/m EGF,
在原代培养的 时候,可以加少量血清,有利于贴壁,但血清同时容易促角化,所以原代第二天要更换回无血清的K-SFM。
测ATP活性或膜流动性,没做过,不便多说。
细胞骨架,我们用F-actin做荧光。l
用的什么培养液? 我一般用 Invitrogen的 K-SFM,加 10 ng/m EGF,
在原代培养的 时候,可以加少量血清,有利于贴壁,但血清同时容易促角化,所以原代第二天要更换回无血清的K-SFM。
测ATP活性或膜流动性,没做过,不便多说。
细胞骨架,我们用F-actin做荧光。l
human 的 keratinocyte, 我一般用 Invitrogen 的 Epilife Medium 加 Human Keratinocyte Growth Supplement (HKGS)。
角质细胞对钙浓度很敏感,如果太高,就会角化,停止生长。促进生长的最佳浓度是0.06mM。血清的钙离子浓度远超过0.06mM,所以尽量少用了。
原代细胞最好是从新生儿包皮分离出来的,我是用mitomycin处理过的NIH3T3做feeder layer, 然后用DMEM加10% Fetal Bovine Serum, 加 胆碱毒素,加表皮生长因子,加氢化可的松,来培养。
角质细胞对钙浓度很敏感,如果太高,就会角化,停止生长。促进生长的最佳浓度是0.06mM。血清的钙离子浓度远超过0.06mM,所以尽量少用了。
原代细胞最好是从新生儿包皮分离出来的,我是用mitomycin处理过的NIH3T3做feeder layer, 然后用DMEM加10% Fetal Bovine Serum, 加 胆碱毒素,加表皮生长因子,加氢化可的松,来培养。
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