毛利小五郎的徒弟
pcr产物条带很亮,但胶回收后什么都没了,用的56度溶的胶,溶胶后还加了等体积的异丙醇,是什么原因呢?
地包天松鼠
你胶回收回收了多少,胶回收损失挺大的,多跑几个孔一起回收试试
dxyc42u
异丙醇沉淀时间是多少呢,有可能是沉淀时间不够
huarenqiang5
考虑以下几点原因:
1、没回收上,可能操作过程中有误,最后一步加水洗膜是否加到膜的正中间。
2、回收之后上样量一般都要大点才可以看到。
loveliufudan
如果在PCR产物分析后,出现了亮条带但在胶回收过程中没有回收到任何DNA产物,可能有以下几个可能的原因:
1. 溶胶温度过高:使用56度溶解胶可能导致PCR产物的降解。某些PCR产物在高温下会变性并降解,从而导致无法回收。建议尝试较低温度来溶解胶,例如使用50度。
2. 异丙醇量不足:异丙醇通常用于沉淀DNA,有助于DNA从琼脂糖胶中析出。如果异丙醇的体积比例太低,可能导致DNA无法沉淀下来。通常建议使用等体积(与样品体积相等)的异丙醇进行胶回收。
3. 沉淀条件不适当:沉淀DNA需要适当的离心速度和时间,以确保DNA可以完全沉淀下来。如果离心条件不足或离心时间太短,DNA可能无法充分沉淀,导致回收失败。
4. PCR产物浓度低:如果PCR产物的浓度非常低,可能无法在胶回收过程中可视化。在这种情况下,建议尝试进行浓缩或增加PCR反应的循环次数,以增加PCR产物的浓度。
请注意,这些是一些常见的原因,但还有其他可能导致胶回收失败的因素。如果问题持续存在,建议再次检查实验步骤、重复实验或尝试其他胶回收方法以进一步排除问题。