大鼠原代骨髓间充质干细胞培养时如何避免污染？近期提的一批细胞有两皿出现了污染。再请教大家，鉴定BMSC的经典marker有哪些？

细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。同时，在无菌过滤操作中，随着滤过体积的增大，滤膜破损的可能性增加，故应选择最后过滤的液体进行检测。各种抗生素性质不同，对各种微生物的作用也不同，联合应用比单用效果好，预防性应用比污染后使用好。但反复使用抗生素会使微生物产生耐药性，且对细胞本身也有一定影响，因此为避免诱导抗药细菌，应定期更换培养系统中的抗生素，或尽可能不用抗生素处理。

3、从操作者做起

（1）进无菌室前要彻底洗手，按规定穿隔离衣。开始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。

（2）操作者动作要轻，安装吸管帽、打开或封闭瓶口等操作应在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意，金属器械不能在火焰中长时间烧灼，以防退火；烧过的器械要冷却后才能使用；已吸过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管内的培养液成分如蛋白质等烧焦后会产生有害物质，吸管再用时会将其带到培养液中；胶塞、橡皮乳头及塑料的细胞培养用品过火焰是也不能时间太长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养细胞，同时塑料细胞培养用品也会产生变形影响使用。

（3）操作时尽量不要谈话，咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。

（4）使用培养液前不宜过早开瓶，开瓶后的培养液应保持斜位，避免直立，以防止下落细菌的污染。不再使用的培养液应立即封闭瓶口，培养的细胞在处理之前勿过早暴露在空气中。

（5）操作完毕后应整理好工作台面，用消毒水浸泡的纱布擦拭台面。

（6） 吸取培养液、细胞悬液时，应专管专用，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去，以防止污染扩大或造成培养物之间的交叉污染。无菌室的彻底消毒。

培养前需要彻底消毒，注意实验室通风和无菌操作，注意培养皿和器械材料的消毒灭菌可以有效防止污染

1. BMSC 经典 marker 包括CD29、CD44及CD105等细胞黏附分子。
2. 大鼠原代骨髓间充质干细胞培养时，可以采取以下措施来避免污染：

• 严格遵守无菌操作规范，保持培养环境的洁净。
• 培养前对培养器具进行消毒处理。
• 选择合适的培养基和血清，以保证细胞的正常生长。
• 定期更换培养基和血清，避免细胞过度生长和污染。
• 定期检测细胞的纯度和活性，及时发现并处理污染问题。

在工作台紫外消毒后，采用通风机通风 3min。以 75%酒精擦拭操作台和双手。无菌条件下，准备好大剪刀、止血钳、眼科剪刀、眼科镊子、干净培养皿。将大鼠仰卧在超净台内的干净培养皿上。整个过程严格无菌，取骨髓间充质干细胞的整个过程都需要谨慎，保证无菌操作。