如何建立耐药细胞系

取处于对数生长期的肿瘤细胞（汇合度60%-80%），加入起始浓度为低浓度（建议为亲本细胞株的IC50的1/10-1/5）的药物作用24h，弃去培养液，PBS清洗2遍，更换不含药物培养基，细胞恢复生长后，消化传代复以低浓度作用细胞24h，待细胞增殖至正常形态后，重复上述药物冲击，每种浓度冲击6-8次。待细胞在此浓度稳定生长后，提高药物浓度继续培养，药物依次递增浓度加药。药物诱导历时6-8个月，直到细胞能够在浓度的药物中稳定生长。

1.确定敏感剂量：首先需要通过药敏试验来确定敏感细胞对药物的最低有效剂量。

2.逐步增加药物浓度：从敏感细胞的最低有效剂量开始，逐步增加药物的浓度。每个浓度的细胞应该被长时间地培养（通常为1至2周），直到它们可以生长到与对照组相同的密度。

3.确定最终药物浓度：在不断逐步增加药物浓度的过程中，需要不断地测试细胞的敏感度，以确定最终的药物浓度。最终的浓度应该高于原来的有效剂量，但不能太高以至于导致大部分细胞死亡。

4.培养稳定的耐药细胞系：维持细胞在最终浓度的药物下生长，直到形成稳定的耐药细胞系。需要定期检查细胞的生长情况，以确保它们保持耐药性。

5验证耐药性：建立耐药细胞系后，需要进行一系列的验证实验来确认其耐药性。这些实验可以包括MTT试验、细胞凋亡分析、流式细胞术等。

需要注意的是，建立耐药细胞系的过程可能需要长时间和大量的努力，而且结果也可能是不可预测的。此外，为了确保实验的可重复性，建议在建立耐药细胞系之前先进行足够的实验设计和数据分析。