马甲不是本人凎
新手养细胞,传代后细胞变成团块,而且背景有小圆点不知道是污染还是细胞皱缩。用的是DMEM/F12一比一培养基,传代一周后,细胞仍然长的很稀疏,想问一下有没有养H295R细胞点的大佬方便不方便让新手看一下正常的细胞状态是怎样?
z流沙z
小圆点可能是细胞碎片,可以pbs多洗两遍,消化离心后可去除。细胞培养主要注意细胞密度和控制消化时间
毛利小五郎的徒弟
小黑点大概率是污染,不符合细胞浓缩的表现
loveliufudan
下面是一些养护建议:
培养基:建议使用含有10%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基。可以添加0.1 mM L-Ascorbic Acid 2-Phosphate (Asc-2P)和1% L-glutamine等增加细胞生长和稳定性。
培养条件:细胞应在37°C、5% CO2的细胞培养箱中培养。培养器内应保持湿度和通气性。
细胞传代:建议每7-10天传一次代。当细胞到达80-90%的密度时,将培养液去除,用PBS洗涤细胞两次,加入胰酶溶液(0.25%胰酶+0.05% EDTA)消化细胞,放置5-10分钟,用完全培养基停止消化,离心沉淀下来的细胞,将细胞转移到新的培养皿中。同时,不要使细胞过于密集,应保持适当的细胞密度。
污染问题:细胞在培养过程中可能会出现细菌或真菌污染。建议检查细胞的形态和密度,及时更换培养皿和培养基,以减少污染。
关于细胞团块的问题,可以尝试使用胰酶等酶类消化细胞团块,将细胞分散开来。如果细胞团块过大,也可能是过度密集造成的。此外,注意细胞培养的时间和次数,过度传代也会导致细胞形态和生长异常。如果细胞形态和生长依然异常,可以重新开始培养或者购买新的细胞株。