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HaCAT 细胞用蛋白干预之后,加入cck 8不显色

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顺利毕业求求了

  1. 第一列是对照组,第二列是空白组。后面是用不同浓度的蛋白干预细胞的实验组,每个孔是1万个细胞。
  2. 因为所有的蛋白浓度较低,比如1ng /ml ,我的蛋白母液是浓度比较高的,所以稀释了1000倍后,按照目标浓度和培养基配制。1000倍按10倍10倍的稀释,没有直接稀释到1000倍。
  3. 图1是加入cck8后孵育一小时左右,实验组还是没有变化。镜下观察细胞已经看不清楚了形态了。
  4. 上一次做实验,因为加的浓度高了十几ng ,稀释的100倍,cck8加入20分钟之后就显色了。细胞形态虽然有变化,但是还是能看到的。
  5. 请问有没有小伙伴知道,这种情况是细胞的问题,还是稀释出了问题,或者是其他步骤出了问题呀?另外细胞形态看不清楚,就是死亡了吗?
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4 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

可以延长cck8的孵育时间,然后观察显色结果。

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loveliufudan

有帮助

几个可能的原因可以导致实验组未显色:

细胞密度过低:您使用的细胞密度为1万个细胞/孔,这可能太少,导致细胞在接受刺激后无法产生足够的代谢产物以显示出颜色变化。建议尝试增加细胞密度,以获得更好的结果。

蛋白千预浓度过低:即使您在初始蛋白质母液的浓度很高,但如果您将其稀释1000倍,可能会导致蛋白质浓度过低,无法产生足够的刺激效应。您可以考虑在下一次实验中,使用更高的蛋白质浓度进行实验,并根据需要进行适当的稀释。

实验时间不足:您在实验后等待1个小时,可能不足以观察到颜色变化。您可以尝试增加实验时间,或者使用更敏感的检测方法,例如荧光染料。

至于细胞形态不清楚的问题,这可能是由于细胞死亡或受损引起的。您可以尝试使用显微镜观察细胞的形态,并评估其健康状况。如果细胞已死亡,则可以考虑调整实验条件以获得更好的结果。

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z流沙z

有帮助

cck8关键在于存活的细胞量,一个是铺板的细胞量要足量且适宜,另外一个是处理因素的剂量,不能引起细胞大量死亡,如果读值太低可以延长至4h

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顺利毕业求求了user-title

后面在显微镜下看了下,是细胞死亡了。


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sswei

有帮助

应稀释有问题,出现细胞死亡,加入cck8不显色。

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顺利毕业求求了user-title

您说的没错,后面照了一下,细胞确实是死亡了已经。但是一般贴壁细胞不是死亡会飘起来吗?我看的时候也没有看到飘起来的细胞。应该是稀释出了问题。


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