【求助】HaCaT细胞的磷酸化Akt(473)背景高

我在做HaCaT细胞的磷酸化Akt(473)时，背景比较高，该怎么办？（即未处理组的Akt比较高）
请高手支招。
谢谢

说得太粗略了。

我做的细胞是HaCaT
看看加入药物后HaCaT的磷酸化Akt是否有增高，
所以希望没有加药的那一组HaCaT的磷酸化Akt水平低
但是实际做时，发现没有加药的那一组HaCaT的磷酸化Akt水平比较高
所以想问问各位高人，有什么办法把没有加药的那一组HaCaT的磷酸化Akt水平变低？
具体做法是，将HaCaT细胞分入六孔板中，细胞贴壁后，吸出培养基，加入DMEM饿12小时，然后加药处理。

1.首先检查是否你的内参（actin或者GAPDH）一致，保证上样量的一致性。
2.如果内参表达一致，则说明操作无问题。
3.然后你需要做一系列的时间点，比如说加药后0min， 5min，10min，30min，1hr，3hr，6hr，12hr，24hr，48hr。考察p-Akt的time-dependant 变化。（不要嫌麻烦）
4.另外在正常情况下对照组的p-Akt就是有一定程度的表达的，如果你的药物可以诱导p-Akt，那么加药后应该有增高的趋势（不会因为你的对照组有pAkt的表达就看不出了），相反，如果加药后pAkt降低了则说明你的sample可能抑制了PI3K/Akt通路，也可能有这样的情况啊。
重要的是拿到结果后怎样对其进行合理的解释，而不是让实验结果符合你的预期设想！为什么一定要你的sample促进pAkt的表达呢。

建议：先拿到time-dependant p-Akt expression western blotting data, 然后查资料，对结果进行合理的解释。如果有问题可以继续讨论。
别忘了给我投票啊，呵呵。

谢谢magichunter战友