肿瘤干细胞传代

传代和扩培肿瘤球（tumor spheres）的方法可以因实验目的、肿瘤类型和细胞培养条件等而异，但以下是一般的操作步骤：

用PBS或无酶胰消化液将肿瘤球收集起来，放到50 ml离心管中，然后离心洗涤2-3次，去除细胞碎片和培养基残留物。

将肿瘤球重悬于新的培养基（如肿瘤球培养基、serum-free medium等），一般是将每个肿瘤球接种到新的96孔或24孔培养板中。

等待肿瘤球重新附着和生长。通常需要3-7天左右，可以根据实验需要适当调整。

当肿瘤球重新形成并达到一定大小时，进行第二轮传代，重复步骤1-3。

对于需要大规模扩培的肿瘤球，可以将肿瘤球从原培养板中收集起来，重新离心洗涤后重悬于更大的培养皿（如6孔板、35 mm培养皿等）中，继续培养和扩增。

在整个传代和扩培的过程中，注意细胞培养的条件，如培养基的配方、培养皿的大小和密度、培养温度和二氧化碳含量等，以保证肿瘤球的正常生长和稳定性。

需要注意的是，传代和扩培肿瘤球可能会导致一定程度上的异质性丢失和克隆性减弱，因此在进行肿瘤球的体外研究时，需要认真评估并控制这些潜在影响。

肿瘤干细胞的微球体或者说肿瘤球的传代过程大概是这样的：
1. 离心收集肿瘤球：300g ， 5min
2. 弃掉培养基，用PBS重悬肿瘤球
3. 离心后弃掉PBS
4. 胰酶－EDTA重悬，消化肿瘤球（一般 37度，5min；可根据经验调整时间）。每1-2分钟，用手指Tap离心管底部，使细胞悬浮。
5. 加入培养基终止消化，适度吹打使细胞进一步分散4
6. 离心后弃掉上清，培养基重悬，按适当密度接种。