求小鼠原代T细胞培养问题
家飞的清
最近提取WT小鼠脾细胞，准备用刀豆蛋白活化测增殖，但是无论是阴性分选的脾 T细胞或脾细胞悬液，用过12孔板或24孔板养，细胞密度为undefined10^5/mL-undefined10^6/mL，用10%FBS的1640完全培养基，未铺板前细胞活力95%以上，刀豆蛋白5mg/mL，但怎么都养不好，而且细胞逐渐往孔板中间聚集，类似密集恐惧症，现在不知道是胎牛血清浓度要高呢还是别的问题，3天细胞活力20%左右，下图为第2-3天的图，谢谢各位大神，感激不尽
3 个回答
dxyc42u
胎牛血清浓度没问题，就是每孔细胞有点多了
loveliufudan
从您描述的情况来看，可能有几个原因导致您的细胞增殖效果不佳：
细胞密度太高或太低：您提到的细胞密度范围较广，可能会影响细胞增殖。过高或过低的细胞密度可能会导致细胞凋亡或聚集在孔板的中心，阻碍细胞的增殖。
细胞培养条件不合适：细胞培养基、血清、CO2气氛和温度等条件对于细胞增殖至关重要。您使用的完全培养基和10% FBS看起来没有问题，但是如果您的细胞对CO2气氛或培养基成分有特殊要求，则可能会影响细胞增殖。
刀豆蛋白的浓度不合适：刀豆蛋白的浓度过高或过低都会影响细胞增殖。您使用的5mg/mL的刀豆蛋白浓度比较高，可能会导致细胞凋亡或过度激活。
可能存在其他未知因素：您没有提到可能存在的其他因素，如细胞的健康状态、感染、污染或细胞自身特性等，这些因素也可能会影响细胞增殖。
针对这些问题，您可以采取以下措施：
优化细胞密度：尝试在不同细胞密度下进行培养，以找到最适合您的细胞的密度范围。
确认培养条件：尝试使用不同种类的培养基、血清和CO2气氛，以找到最适合您的细胞的培养条件。
调整刀豆蛋白浓度：尝试在不同浓度下使用刀豆蛋白，以找到最适合您的细胞的刀豆蛋白浓度。
检查其他潜在因素：请确保您的细胞没有感染或污染，并确认您的细胞对于进行的实验所选的培养基和试剂具有相容性。
毛利小五郎的徒弟
细胞密度有点高，然后用血清培养
