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huvec血管形成实验求助

相关实验:🔥 原代细胞培养实验

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压哨绝杀

做了一次血管形成结果完全失败,有几个问题想请教:

1.胶怎么加入和处理能保证平整呢,镜下完全没有平整部位,甚至有地方都没铺到胶(感觉像加的胶不足,按50μl加的),是否一定要把整个底都铺满呢

2.如何操作能避免气泡形成呢,感觉每个孔都加出了气泡。。。

3.加入细胞数量问题,96孔究竟加多少合适呀,因为后续可能要transwell共培养,可能必须得改用24孔,那又要加多少呢

4.胶用之前究竟需不需要稀释呢,我这批胶蛋白浓度8.1mg/ml,我看到有文献说最好大于10。

其余想到再向大家请教,非常感谢

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2 个回答

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Eason老歌迷

有帮助

具体的方法如下,huvec细胞细达到80%汇合度后准备消化,一般过夜培养后的细胞状态更佳,收集细胞进行计数,并按照需求梯度稀释调整细胞的浓度,请一定保证细胞状态完好。24孔板加入200ul的huvec细胞悬液,浓度约为12-20万个细胞,建议做复孔;细胞加入后不应该移动培养板,放入37度孵箱约4小时左右即可进行观察血管是否形成。一般在15小时后成管会开始缓慢皱缩凋亡。

第一个问题,在你细胞加入后,你就不能移动培养板,如果移动可能会造成不均匀。

第二个问题,加细胞悬液的时候,可能不要让枪头吹出气泡。然后细胞状态也要好,这样结果会更好。

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whilt-shirt

有帮助

加完胶后可以摇一下,将胶混匀。

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