dapi用后背景高

如果DAPI背景太高，可能有几个原因。一个是组织切片太厚。二个是封闭不佳，如果背景太强，可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间。三是二抗有非特异性结合。四是抗体浓度太高，降低所使用的抗体浓度或调整孵育时间。五是洗涤不充分，染色有很多步骤，其中又包括很多洗涤的步骤。在实验过程中，确保洗涤到位。

有可能是染色剂浓度太高导致的，建议稀释一下再试试

你这个感觉不是dapi的问题，如果dapi浓度高或者曝光过度应该是整个视野差不多的，但你这个只是局部过曝，其它的细胞核还是属于比较淡的染色。而且视野中还有很多小颗粒的蓝染，这种情况比较像是被支原体或者细菌污染了。像石蜡片子保存受潮，时间久了就会这样。

可能是染DAPI的时候时间过久，出现了非特异性结合。