DAPI染色

DAPI 染色

1．原理

DAPI为4’，6二脒基-2-苯吲哚(4’，6―diamidino-2―phenylindole)能与双链DNA小槽，特别是AT碱基结合，也可插入少于3个连续AT碱基对的DNA序列中。当它与双链DNA结合时，荧光强度增强20倍，而与单链DNA结合则无荧光增强现象，因此是一种简易、快速和敏感地检测DNA的方法。DAPI的荧光强度虽较Hoechst低，但荧光稳定性优于Hoechst；其特异性较溴化乙啶(ethidlium bromide，EB)和碘化丙啶(propidium iodide，P1)高。

2．溶液配制

(1)0．01mol／L PBS(pH7．0)：取0．1mol／L NaH2 PO4 ・H2 O 34ml、0．1mol／LNa2 HPO4 66ml、NaCl 0．9g，溶于900m1双蒸水；

(2)DAPI储存液：将0．5mgDAPI溶于5．0ml PBS中，分装，低温长期保存；

(3)DAPI工作液：用PBS稀释DAPI储存液，终浓度为0．1ug／ml。

3．染色程序

(1)培养的单层细胞(未固定)或新鲜组织的冰冻切片等，PBS漂洗5分钟；

(2)DAPI工作液室温染色5～20分钟(可根据实验材料的染色结果而定)；

(3)PBS漂洗；

(4)水溶性封片剂封片，游离细胞也可直接用含DAPI的PBS封片；

(5)荧光显微镜观察。