一般拿到细胞后，应该注意什么?

拿到细胞以后呢，就先不要开盖，放在培养箱里放一段时间，在显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞拍照，观察培养基的颜色，有没有漏液情况，细胞有没有污染 。

牢固问题。⽐如293T，平时贴壁就不是很牢，在装满的培养基瓶⼦⾥⾯，会发⽣⼤⽚的脱落，细胞聚集在⼀起，但是细胞⽣长还是正常的，通过离⼼收集，加以胰酶的消化，重新打散，⼜可以正常的贴壁⽣长。

2.当通过上⼀步的观察，细胞初步没有任何问题时，进⾏下⼀步操作。当收到的细胞密达到80%左右时，则处理如下：弃除瓶中⼤部分培养基，仅保留5到10mL培养所需的常规培养基；或更换新鲜的培养基，置于培养箱中，随后每天观察。细胞在低于正常⽣长温度情况下，会调整为静⽌期，或者慢速⽣长期，必须恢复37度的环境⾄少3个⼩时左右，才能重新调整到接近对数⽣长期的状态，在对数⽣长期进⾏细胞的传代会⼤⼤增加传代的成功率，和细胞的存活率。

3.如果经步观察发现细胞密度超过90%，并且细胞状态很好时，则复温后2个⼩时需要⽴即传代。传代的⽐例应依据不同的细胞⽽定。对于⽣长⽐较快，状态稳定，不易受外界影响的细胞可以⼀次多传⼏瓶；对于⽣长较慢，细胞⽐较薄，状态容易波动的细胞类型，⼀次少传些，保证每瓶细胞密度⼤些，便于稳定⽣长。⾄于⼀些⽐较陌⽣的细胞，次处理也可以依照第⼆种情况。

传代操作：

1.吸除培养瓶内旧培养液。2.加⼊⽆菌pbs洗液（5-8mL）轻轻润湿细胞，稀释多余的培养基，之后吸⾛洗液，动作要轻，不可吹打到细胞。3.向瓶内加⼊含0.25%EDTA的胰蛋⽩酶混合液少许，以能覆满瓶底为限。4.置温箱中2~5分钟，⼀旦镜检发现细胞质回缩，细胞间隙增⼤后，细胞变圆，⽐较松动后，⽴即终⽌消化。

从物流收到细胞后,先检查培养瓶是否完好,培养液是否外渗,培养液是否浑浊,并核对瓶身上的标签信息,细胞数量是否与发货清单一致

收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。