关于原代细胞培养的问题？

大多数原代贴壁细胞贴壁时间是6h到12h，细胞不贴壁有好多种原因的：

1、如果你用玻璃培养瓶培养的话，有可能你的瓶子没处理好；建议你用一次性培养瓶，进口的都可以。

2、一般做原代细胞贴壁培养用胰酶消化，消化的程度要掌握好，如果消化时间不到、分散不均匀不贴壁。一般消化有热消化，就是放在37度里消化，时间比较短不好控制，传代培养常用。还有就是冷消化放在4度里，一般在几个小时以上，胰酶浓度也有要求的，一般都用0.125－0.25％之间。ph在7.6左右。

3、还有就是天然培养基的选择，就是血清种类，血清能够使细胞贴壁，并且提供细胞生长的重要营养成分。

可能原因： 胰蛋白酶消化过度 ，支原体污染 ，培养基pH值过碱（NaHCO3分解） ，细胞老化 ，接种细胞起始浓度太低或太高

解决方法： 缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度 ，分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。 使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2

一般做原代细胞贴壁培养用胰酶消化，消化的程度要掌握好，如果消化时间不到、分散不均匀不贴壁。一般消化有热消化，就是放在37度里消化，时间比较短不好控制，传代培养常用。还有就是冷消化放在4度里，一般在几个小时以上，胰酶浓度也有要求的，一般都用0.125－0.25％之间。ph在7.6左右。

还有就是天然培养基的选择，就是血清种类，血清能够使细胞贴壁，并且提供细胞生长的重要营养成分。

如果你用玻璃培养瓶培养的话，有可能你的瓶子没处理好；建议你用一次性培养瓶，进口的都可以。

可以买点促促贴壁试剂，提前先提出来细胞培养皿一下。

不贴壁可能原因及解决办法：1，胰酶消化过度；解决方法：适当缩短胰酶消化时间或降低胰酶浓度。2，支原体污染；解决方法：分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。3，培养瓶瓶底不干净；解决方法：换用新的培养皿或者培养瓶。4，消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当；解决方法：重新配置消化液或培养液5，细胞老化；解决方法：同样，没有可逆的办法，只能及时更换新的细胞。6，接种细胞起始浓度太低或太高；解决方法：根据细胞特性接种适量的细胞。