CD25磁珠分选纯度很低的原因，如何处理？
丁香实验
最近做Trundefined*4~DCD25~D磁珠分选，CD4分选纯度很好，但是CD25纯度只有20-30%，用的是美天旎的产品，完全按照说明操作，分选过程也是小心翼翼，一直在调整，分选前后也是做了流式标记，但是纯度一直上不去，不知各位遇到过这种情况没有，可能是哪些方面原因？如何处理？
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9 个回答
莹啊免疫啊
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可能是磁珠的特异性不够或者量不够，或者是你是两个一起分选的还是分步分选的，一起分选的话，CD4+本身可能就带了一些25+和25-导致结果不好？个人推荐可以试试流式分选，多重筛选还挺省事的。
CXCR3
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分选的纯度不高很有可能是beads的效果不好，可以增加beads的标记量，如果想要纯度高的话，尽量使用流式分选。
西柚味的芋圆
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你分选前有没有进行细胞计数啊，磁珠加的量够不够。温度孵育时间都要确定好，还有一个跟活性很相关的buffer，我们组买的每天尼匹配的buffer好很多
txs900416
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CD4+CD25+细胞在总细胞群体中占的比例很低，大约只有1-2%左右，因此楼主需要计算目的细胞的量选择合适的柱子，此外，使用第二根分选柱对第一次分选得到的20-30%纯度的细胞进行第二次过柱会使得率到90%以上
颜渊溪桥
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分选纯度低考虑磁珠上抗体特异性差，产品批次不同有时会有问题。之前某些分选细胞会用连PE的抗体染，然后再用阳选PE的磁珠分选。
peaceful13
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首先需要检查一下上流式分选的抗体克隆号会不会跟磁珠分选的克隆号发生竞争～最好用推荐的克隆号进行鉴定；其次～CD25+一般都是正选了～纯度不高～可以将收集的细胞二次过柱～提高纯度
空山流水Hz
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1.首先适当增加CD25磁珠加样量吧。 2.增加磁珠孵育时长。 3少洗几遍。
Timy最爱柠檬水
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1⃣️是做分步分选吗？先分选了CD4，再分选CD25？还是同时分选呢？如果是分步分选，第二步加入CD25抗体后可能会出现CD4+CD25-的非特异结合。 2⃣️建议分步分选时，优先分选CD25。
dxy_0mxazdaw
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一般情况CD25的表达量不像CD4那么高，所以磁珠的量以及染色时间要延长才可以。
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