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科研学霸天团,48小时有问必答
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肝纤维化造模
Eason老歌迷
一般造模方法是,成年雄性小鼠,按5ml/kg体重的剂量皮下注射20%CCl4茶油溶液,每5天一次,连续3个月。或成年雄性大鼠,皮下注射60%CCl4花生油溶液3ml/kg体重,首剂加倍,每周2次,共9周。它如果有胀气,我感觉可能是你皮下注射打到肠腔了可能。
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求助🆘bax免疫荧光1:50还看不到绿色荧光为什么呢?做bax的WB也是1:50信号也弱?谢谢
litorch
谢谢高手指点!下次我试一下红光,其他老师能做出来,我和他们条件一样,做出来效果就不好
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【求助】Transwell共培养
balalaLy
这种做法理论上讲是可以的,但实际操作起来可能受影响因素比较多
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问
求助:NFkB这个通路
balalaLy
检测IKK/ikba/P65的磷酸化,ikba的降解情况
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问
求助:HUVEC的选择(原代,细胞系,永生化)
麻黄连翘赤小豆
我以前也养过,买的永生化,虽然永生化,其实传不了几代也会老化,原代比较难提出来,还要看你这个组织里面含量多不多,但永生化比较方便,实验里面用的不多可以用永生化,原代也可以同时试着提出来
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问
TCGA差异基因结果与细胞qP表达结果相反怎么办
bamboopiggy
tcga比的使癌和癌旁,你细胞系怎么比?有正常和肿瘤么?当然肿瘤里面高的基因,在癌细胞中不一定高,你可以多找几个癌细胞
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疑难求解答
bamboopiggy
确定阻断剂没有坏,用的浓度达到参考浓度,甚至稍微高一点。
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T47D细胞培养液中加多少胰岛素
天一湖医者
一般是0.2Units/ml牛胰岛素
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问
CCK8.实验OD值的范围必须在1附近吗?
balalaLy
OD值跟细胞数和孵育时间有关系,孵育时间太久、细胞太满检测结果不是很准的,跟在不在1附近没什么影响。当然,如果孵育时间1-2小时,OD在1以内是比较理想的,说明细胞数比较合适。
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萌新研究生实验求助,beas-2b培养求助?
Eason老歌迷
我们也是用的10%血清+DMEM(高糖)+双抗。如果你的细胞长的很慢,考虑可能是你复苏时候没有复苏好,细胞老化了它就长的慢。如果它是贴壁细胞那就必须用胰酶消化,然后用显微镜观察,变圆了就可以好吹打下来。
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dapi用后背景高
Eason老歌迷
如果DAPI背景太高,可能有几个原因。一个是组织切片太厚。二个是封闭不佳,如果背景太强,可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间。三是二抗有非特异性结合。四是抗体浓度太高,降低所使用的抗体浓度或调整孵育时间。五是洗涤不充分,染色有很多步骤,其中又包括很多洗涤的步骤。在实验过程中,确保洗涤到位。
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关于结直肠癌细胞株的疑问
Eason老歌迷
不一样!结肠癌细胞株和直肠癌细胞株不是一样的。如果要从细胞水平研究直肠癌放疗敏感性的问题,只能用直肠癌的细胞株!,不能用结肠癌细胞株!
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请问,目前mhcc97h还能用于细胞功能实验?
bamboopiggy
MHCC97H细胞,我可以确保是人的肝癌细胞系,没有被鼠污染。因为我用抗人的抗体可以杂出某个蛋白,但是用鼠的没有杂出来。
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颗粒细胞
whilt-shirt
理论上是可以的,但是注意胰酶消化过长会导致细胞活性减弱
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肿瘤细胞,流式,检测凋亡,BDC6流式细胞仪,试剂盒Elabscience
whilt-shirt
有可能是试剂原因,建议更换试剂后再试试
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求答:酶标仪为什么一直测了好多次都是负值?
whilt-shirt
有可能是酶标仪参数没设好导致的
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edu中间一块圆形区域没有染上
Eason老歌迷
可能是出现了环岛效应,表现为连成片的细胞最外环的边缘的细胞荧光强度明显高于被包围在中间的细胞的荧光强度。可能是染色时细胞接触染料的面积、生长在边缘和中间细胞的细胞膜状态不同,也可能因探针跨细胞膜能力不够、探针分布不均匀、标记的温度和时间等条件不当。
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关于coip银染后送质谱的问题
balalaLy
这个银染做得不好,建议重新做一次。用梯度胶跑开一点,上样量不要太大,显影液和敏化液的量可以适当调整。
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自噬大神求教雷帕霉素问题
bamboopiggy
rapamycin是mTOR的抑制剂,而mTOR活化是抑制自噬的,表现为P62的升高和LC3b的减少。所以加入rapamycin促进autophagy后,P62减少,lc3b增加,所以不是促进自身溶酶体的降解。
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细胞培养基浑浊 想请教一下是什么污染?以前没有见过
whilt-shirt
有可能是真菌污染,建议细胞间、培养箱重新灭菌后再开展实验
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