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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
原代细胞分离,例如肠肠皮细胞,分离时间较久,怎么能保证细胞的活力?
橙汁儿青柠味
在冰浴的pbs中分离原代细胞,可以提高细胞存活率
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问
细胞培养时由于没有原来使用的培养基如dmem,于是换成例如1640培养基,经常调换培养基会影响细胞吗?
橙汁儿青柠味
更换培养基容易影响细胞状态,每个培养基的成分不太一样,所以每个细胞的最适培养基不一样
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问
如何对细胞进行准确计数?比如如何证明离心管中只有单个细胞?
Dr_劉医生
可以使用显微镜观察。将细胞悬液放在显微镜下,如果只有一个细胞,则可以看到一个单独的细胞。另一种方法是使用流式细胞术,该方法可以快速准确地计数大量细胞。流式细胞术使用荧光染料标记细胞,并通过流式细胞仪进行计数。
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问
贴壁细胞传代时,用到胰酶消化时,有少量胰酶存在是否会影响细胞状态?
橙汁儿青柠味
存在少量胰酶不影响细胞的,因为加入的培养基能够中和掉胰酶的作用
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问
贴壁的哺乳动物细胞的转染实验完整做法
sswei
贴壁细胞的转染:在准备做细胞转染的前一天把细胞铺进细胞培养皿中,加入完全培养基培养24小时,使得细胞汇合度达到百分之六十到百分之八十。在转染前需要把完全培养基换成无双抗的完全培养基,以排除双抗对转染效率的影响。根据转染的细胞数不同选取适量的纯培养基分别稀释质粒和lipo3000,其中稀释完的质粒中加入p3000充分混匀后再加入稀释过的lipo3000中,把混合液轻柔的吹打混匀,室温孵育20分钟。孵
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问
胰酶消化细胞时间怎么判断从而避免过久或不足?
橙汁儿青柠味
胰酶消化的时间以细胞变圆、轻拍细胞侧壁脱落为佳
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问
3T3-l1细胞诱导分化以后进行油红O染色,着色太深,有的地方黑乎乎的一片怎么解决?
橙汁儿青柠味
可以用pbs多洗涤几遍,另外应注意细胞密度
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问
3t3-l1细胞进行诱导分化时密度在80%可不可以?为啥诱导分化时间越长,细胞之间的间隔会越变越大?
loveliufudan
密度在80%时,3T3-I1细胞可以进行诱导分化,但需要注意的是,细胞密度过高可能会导致细胞自身的压力过大,影响诱导分化的效果。因此,在进行诱导分化前,应该考虑到细胞密度的因素,控制好细胞的数量,以达到最佳的诱导分化效果。关于诱导分化时间越长,细胞之间的间隔会越变越大的问题,这可能是由于细胞分化后的功能和形态发生了改变,导致其对外界环境和邻近细胞的作用方式和联系发生了改变。例如,分化后的细胞可能会
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问
H520鳞癌细胞株做小鼠成瘤实验反复失败,其他细胞株都可以,大家有没有遇到过?
loveliufudan
如果其他细胞株都可以的话,那么你就要考虑是否使用与H520鳞癌细胞株兼容的小鼠品系,是否存在免疫排异反应?
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问
验证某目的基因在肺腺癌细胞株中的表达,细胞株怎么选
汤姆卜丽波
你可以先在网站上用生信数据筛一下,选择有差异表达的细胞株来培养
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问
做的3T3-l1细胞,复苏第八代,结果培养皿里面很多飘起,并且空泡化严重,请教大家是怎么回事?
橙汁儿青柠味
细胞内出现空泡多半是因为细胞老化或者消化过度导致
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问
B16F10细胞培养问题?
汤姆卜丽波
你可以多加血清养一段时间,就是细胞状态不行了
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问
Gpower样本量计算求助
毛利小五郎的徒弟
Gpower样本量计算步骤如下:1、选择统计方法:(Exact—Fisher\F test—方差分析\t test差异性t检验\X2test—卡方检验\Z test—非参数检验)2.进一步选择分类:(这里以t 检验为例)3、确定想得到的参数:①A Priori:研究设计时,想知道所需样本量N②Compromise:α与β固定(不常用)③Criterion:计算α(一般α为0.01、0.05不需要计
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问
亚组分析找不到异质性来源
毛利小五郎的徒弟
建议用年龄作为分组,只要异质性差异不大就可以做,其他的分组都不太合适
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问
有没有战友做无细胞蛋白表达系统啊
loveliufudan
首先,确保您的质粒构建是正确的,包括检查您的DNA序列和构建方法是否正确。此外,您需要选择适合您的蛋白质的无细胞表达系统和载体,不同的蛋白质可能需要不同的系统和载体。其次,确保您的转化和诱导条件是正确的。对于BL21 (DE3)菌株,常用的是IPTG诱导,但是有时过高或过低的IPTG浓度都会影响蛋白质表达。此外,您需要在合适的时间点收获细胞,不同的蛋白质可能需要不同的时间点。最后,确保您的提取条件
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问
TB培养基提质粒浓度低
loveliufudan
TB培养基相对于LB培养基更适合高密度细胞培养和蛋白表达,但这并不一定意味着TB培养基就能获得更高的质粒浓度。下面是可能影响质粒浓度的几个因素:细胞密度:对于大多数质粒表达系统,细胞密度对于质粒表达和质粒浓度都是有影响的。如果您在LB和TB培养基中使用不同的细胞密度,这可能会导致两者之间的质粒浓度差异。培养时间:质粒表达通常需要足够的培养时间。如果您在LB和TB培养基中的培养时间不同,这也可能会导
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问
我的mkn45和28,从公司买的,同时复苏的,用的1640和培养瓶都是一批,但是45长了黑色点点看起来是黑胶虫,28一点问题都没,
橙汁儿青柠味
应是公司冻存的时候就有点问题,因为是一起复苏的,还用的一样的培养基
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问
细胞贴壁看不清楚
毛利小五郎的徒弟
不是本身的特性,这个细胞本身贴壁可以看清,考虑细胞密度低或者状态不好
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问
做细胞划痕实验时细胞死亡了
毛利小五郎的徒弟
考虑是血清浓度或类型不合适,先提高血清浓度还是失败的话更换血清类型。
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问
求助,这种情况是不是污染了,如果污染这个是什么菌啊?怎么避免?
dxy_bz3louvw
可能是细胞消化的时候有一些没有吹散,导致细胞有几小团聚堆的,看图片感觉没有污染,如果长菌的话培养基会变混浊的,也可以自己判断一下。
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