有没有战友做无细胞蛋白表达系统啊

首先，确保您的质粒构建是正确的，包括检查您的DNA序列和构建方法是否正确。此外，您需要选择适合您的蛋白质的无细胞表达系统和载体，不同的蛋白质可能需要不同的系统和载体。

其次，确保您的转化和诱导条件是正确的。对于BL21 (DE3)菌株，常用的是IPTG诱导，但是有时过高或过低的IPTG浓度都会影响蛋白质表达。此外，您需要在合适的时间点收获细胞，不同的蛋白质可能需要不同的时间点。

最后，确保您的提取条件是正确的。您可以尝试使用不同的提取缓冲液，添加tRNA、细胞色素C等辅助因子来提高蛋白质表达。另外，您需要考虑蛋白质的可溶性问题，尝试使用不同的洗涤和溶解条件，以及添加融合标签或标记来提高蛋白质的可溶性和稳定性。

建议更换载体，tRNA加入前是有阳性表现的，所以考虑是载体不合适。