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科研学霸天团,48小时有问必答
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心肌缺血导致心肌细胞的死亡很多?
汤姆卜丽波
心肌缺血是一个过程,在这个过程中细胞得不到氧气和很多养分就会死亡
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小鼠眼眶后静脉丛取血求问
Eason老歌迷
小鼠眼眶后静脉丛取血,一次也就能取0.2-0.3ml。离心时在4度,离心1500rpm,5min即可。
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HK-2高糖造模
Eason老歌迷
HK-2细胞高糖造模培养基可以加血清。细胞消化种96孔板,待细胞贴壁后,更换无血清培养基使细胞同步化24h后,换成高糖培养基。
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H9C2建心肌损伤模型!
Eason老歌迷
有几篇文献,你可以参考一下,讲的很详细。“Irisin对高糖诱导的糖尿病心肌肥大H9c2细胞模型的作用及机制研究”、”血管紧张素Ⅱ诱导H9c2心肌细胞肥大模型的建立及泛素化结蛋白水平的变化 ”、“蛋白质二硫键异构酶在H9c2心肌细胞高糖及缺氧/复氧损伤保护的作用机制研究”
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老鼠怀孕
Eason老歌迷
如果有精子表明有交配行为发生,有阴栓说明雌鼠受到性行为刺激。但是你这个阴道涂片没有精子,可能压根没有发生性行为。一个是老鼠的年龄很重要,要选精壮的。二个是营养对于生育也很重要,雌、雄鼠最好能用繁殖鼠粮饲喂,没条件的可适当喂些熟鸡蛋、生瓜子之类的东西。要提高成功率,最好先确定雌鼠的动情周期,方法园子里有介绍。待发情期将雌雄合笼,这样受孕成功率高。其实还可以雌雄1:1合笼,或是前半夜一只雄鼠,后半夜换
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用4-OHT进行体外敲除
Eason老歌迷
我推荐你参看几篇文献,讲的比较全面“4-羟基他莫昔芬对体外培养前列腺平滑肌细胞的作用”、“The Hippo kinases LATS1 and 2 control human breast cell fate via crosstalk withERa”。文章方法里都讲了如何利用4-oht来做体外敲除的
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最近做实验结果一直不佳,想来求助各位有经验的大佬
Eason老歌迷
你要是做间接elisa实验,一定最好就是抗原蛋白质浓度不应超过 20 μg/ml,因为这将使微量滴定板上的大部分可用位点饱和,确保样品所含抗原的浓度在抗体检测范围内,不然实验结果不佳。一般构建肿瘤模型,裸鼠主要保证周龄,周龄小一点好。可能是细胞状态差,活力不好,或是肿瘤细胞不易成瘤,需加入Matrigel辅助或增大接种量或更换细胞系。也可能是小鼠周龄太大,或小鼠免疫排斥,建议更换免疫缺陷程度更大的
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穿刺针使用
whilt-shirt
这个要看做什么实验了,不过一定要注意避免交叉污染
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求助:小鼠肝脏HE染色切片分析
whilt-shirt
看这个切片有点像是出现了脂肪空泡
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巨噬细胞RAW264.7造模问题
whilt-shirt
这个一般用无血清的培养基加药。
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关于神经递质检测
illusio
没有什么影响,但是不建议放太久,存放的时候要避免中途反复冻融
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博莱霉素肺纤维化建模
Eason老歌迷
我看文献里大家都在用博来霉素a5,
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脑TTC染色 为什么一面染色很好一面染不上啊,我翻过组织了,每次都是先朝下的一面着色好,另一面就不行了
Eason老歌迷
染色不均匀,我第一次 5min翻一次面 染30min 染的两面很均匀。第二次15min翻一次面 染30min 就是一面白 一面红。所以应该是要多翻面。
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成年大鼠下丘脑神经元培养
illusio
取当日新生的 SD 大鼠,在超净工作台内断颈处死,75%酒精浸泡消毒,解剖显微镜下分离胎鼠皮肤及脑膜,PBS 冲洗干净。用眼科剪去掉部分大脑皮质,下丘脑组织位于视交叉和视乳头之间两侧下丘脑沟以内,向背侧大约 2mm 深。用眼科镊夹取深约 0.5—1mm的下丘脑组织块到烧杯。PBS 轻柔冲洗取下的下丘脑组织 4-5 次。2,分离细胞剪下的下丘脑组织经Hanks液冲洗后仔细剪碎成约1m㎡的小块。加入0
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大家用ACD的试剂盒做脑组织的RNAScope都切多厚的片子?15um很容易卷是怎么回事
Eason老歌迷
一般我们都是用冰冻切片机将包埋好的组织切成 7-15µm(15μm) 的切片。如果你总的话,可能是脱水没脱好,或者是刀片该换了。
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为什么ttc染色总是出现一面泛白,一面玫瑰红加白色病灶
Eason老歌迷
是不是没染均匀啊?然后你的TTC溶液最好现配现用,缓冲液可以用配好的。而且染色时必须避光,必须37℃温孵。
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显微镜拍照问题
balalaLy
就是先拍一张低倍的照片,一般4x或者10x,然后再在低倍照片中找一个视野就是框出来的位置,拍一张高倍的40x倍或者100x照片
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慢病毒感染huh7细胞
Eason老歌迷
病毒不能在光学显微镜下看见。病毒都没有细胞结构,而且比细胞小的多,只能用纳米来表示他们的大小。病毒不能独立生活,必须生活在其他生物的细胞内。
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求助hp相关胃粘膜肠化模型的建立方法
Eason老歌迷
我自己之前做的时候,参看的这篇文献”实验动物胃粘膜肠化生模型的建立及其应用”
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求助:小鼠MACO手术相关技巧:
Eason老歌迷
我个人觉得,用Zea longa基础上改良的颈内动脉线栓加环扎法制作的大鼠脑缺血模型成功率高,症状明显。大鼠清醒后出现同侧Horner征(梗塞灶同侧瞳孔缩小,眼裂变小,眼球内陷)、向对侧转圈爬行、提尾向对侧旋转、提尾倒立时对侧前肢屈曲者为造模成功。可用于大鼠脑缺血再灌注损伤的科研实验。你要是操作的话,一定要注意线栓头要圆滑,大小合适,建议用玻璃胶头。显微镜下实行手术应注意手法轻重,避免损伤血管造成
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