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问
做流式消化染抗体后不固定，可以第二天上机吗？效果影响会很大吗？
毛利小五郎的徒弟
不可以你可以固定好隔一天上机，但是不可以不固定
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问
做免疫组化，不同组织怎么取材，才能有代表性？
毛利小五郎的徒弟
给你推荐一篇文章，这篇文章里面很全
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问
免疫组化，组织冻融3次，会对结果造成什么影响
毛利小五郎的徒弟
免疫组化组织这样几次冻融，蛋白会变性，影响后续实验
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问
免疫组化，特征性如何，什么情况会出现假阳性？
毛利小五郎的徒弟
1. 消除病理性色素的影响： 当所检动物由于出血等原因造成吞噬含铁血黄素细胞增多时，为防止其与 DAB 显色呈现的黄褐色发生混淆，优先选用AEC显色剂。组织固定时间过长时，切片中容易产生福尔马林色素颗粒，影响结果观察，取材时应充分用流水冲洗，以消除影响。 切片制作不当引起的非特异性着色 在严重变性、坏死及炎性病灶处，在胶原纤维和结缔组织部位，在切片裱贴不平、折皱处以及组织边缘部位常会出现非特异
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问
免疫组化，一般切多少张片子，组织没有固定，冻融过，还能用吗？
毛利小五郎的徒弟
10-15个吧 ，没有固定冻融过最好不用了
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问
免疫组化，是否能够定量，怎么实现？
毛利小五郎的徒弟
可以的，先把免疫组化做了然后 用imageJ 分析
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问
心脏导管取血，经过大的血管怎么避免血管内皮损伤？
毛利小五郎的徒弟
操作轻柔，减少与内壁的摩擦。多加练习
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问
流式细胞检测什么时候需要去黏连？什么时候用fsc的信号去黏连，什么时候用荧光信号去黏连？
毛利小五郎的徒弟
在流式检测中，我们需要进行单细胞分析，有时样品中会混有两个或多个细胞的聚集体，这个时候需要去粘连
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问
检测胞内蛋白的表达水平用WB和流式细胞仪的区别是什么？
毛利小五郎的徒弟
WB是金标准，流式可以检测细胞膜和细胞内蛋白
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问
流式细胞仪可以测定悬浮细胞的数量吗？
juyue2010
可以的，直接进行细胞计数更便捷
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问
AnnexinV 检测细胞凋亡，流式结果图怎么看？
毛利小五郎的徒弟
在二维散点图上，PI 和 annexin V 分别是X和Y轴。一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞，annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞，而双染是凋亡中期的。需要在散点图上先画出4个象限，位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂，在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。
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问
除了熟练操作之外，还有什么方式能节约试验试剂，提高试剂使用率。
juyue2010
合理的实验设计，最少试验次数拿到结果。
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问
同一批小鼠细胞，可以用不同品牌的抗体一起孵育吗，会不会有排斥的情况？
毛利小五郎的徒弟
不要一起孵育，可以用剥离Buffer处理后再加另外一种抗体，在同一张膜上显色，配方园子里有；多抗是有可能有多条带的，和它是多克隆抗体有关，特异性差，会有交叉反应。
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问
我想一次染小鼠免疫细胞，包括b，t，巨噬细胞，单核细胞，孵育抗体的次序有要求吗？
毛利小五郎的徒弟
这个应该不分先后顺序，都可以的。
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问
流式细胞术散点图参数中FSC-A与FSC-H是什么意思
毛利小五郎的徒弟
fsc代表的是forward scatter，这个参数和细胞的大小成正比。A 是area的缩写，H是height的缩写。这是机器在记录信号时所采用的参数（不显示在用户界面，一般在调试机器的时候可以显示）每个细胞通过激光的时候，机器都会记录一个波状信号（一个拱形的信号），H就是这个拱的高度（代表的是信号的强度），A就是这个拱的曲线下面积，代表信号强度和细胞大小的关系。其实还应该有一个参数W，是wid
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问
流式做细胞凋亡怎么设门？
毛利小五郎的徒弟
通过流式细胞术分析细胞样品时，欲获得更加准确的分析结果，应用最优化的设门策略非常重要。要考虑的因素包括：1) 排除细胞碎片2) 应用合适的荧光阴性对照3) 排除死细胞4) 如果合适，使用一种共享标志物（比如 CD45 白细胞标志物或与之等效的泛-细胞群标志物）染色5) 设置必需的荧光分析点图
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问
流式抗体可以持续多长时间？
小小小小小芳
流式抗体一般都是直接带荧光标记的，一般情况下4°C避光可以保存一年，勿-20°C保存，荧光基团在反复冻融之后会从抗体上脱落。
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问
怎么有针对性的选择流式抗体？
juyue2010
根据实验，确定好marker，从文献中查找相应的货号
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问
内源性过氧化物酶的灭活时间和浓度是什么？
毛利小五郎的徒弟
（1）一般3%过氧化氢灭活时间短点，可以10min左右；而0。3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间，一般10~30min。
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问
小鼠th17/treg细胞怎么测？
小小小小小芳
需要破膜，用适量体积的Flow Cytometry Staining Buffer重悬细胞，并上机检测并分析。注：由于染色过程中使用了细胞固定和破膜，对比起活细胞在形态上会有一定变化，因此FSC/SSC图中圈门时需要做一定调整。
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