ELISA实验显色问题

用碳酸盐包被液包被抗原，抗原对照用包被液做对照；然后使用3%的明胶封阻，封阻后血清用PBS稀释，并用PBS做血清对照；二抗是HRP标记的二抗，也用PBS稀释，并用PBS做二抗对照。

现在出现的问题，是抗原对照和血清对照都显色，而二抗对照不显色，并且同处理的抗原的吸光度基本上没差别。各位大佬，这是什么原因导致的？应该怎么解决？