酶联免疫吸附实验

酶联免疫吸附实验的基本原理是多数蛋白质、多肽、多糖和细菌脂多糖等抗原能够直接吸附到塑料材质（如聚苯乙烯）的固相载体表面，结合牢固足以耐受后续的洗涤过程而不被洗脱，同时仍然保持其生物学活性，例如吸附于固相载体表面的抗体（蛋白质），其结合抗原的功能不受影响。

酶与抗体（抗原）的共价结合不会影响复合物中抗体（抗原）和酶活性，应用最多、效果较好的有辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）。

用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原-特异性抗体-酶标二抗或抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物与其他物质分开，确保了在加入酶作用底物后产生的显色反应，其颜色深浅与结合在固相载体免疫复合物上的酶含量成正比，降低了非特异性显色，提高了检测敏感性。

HRP的底物为H2O2，催化反应式为：HRP+H₂O₂→HRP•H₂O₂+DH₂→HRP+D+2H₂0 其中，DH₂为供氧体，H₂O₂为受氢体。

DH₂-般为无色化合物，如邻苯二胺（O-phenylenediamine，OPD）和四甲基联苯胺（3,3,5,5-tetramethylbenzidine， TMB）。

经辣根过氧化物酶作用后成为有色的产物，分别在492 nm和450 nm波长有最高吸收峰，可用于比色测定。

AKP一般采用对硝基苯磷酸酯（p-nitrophenylphosphate，p-NPP）作为底物，产物为黄色的对硝基酚，最佳吸收波长405 nm。