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PCR跑完没有溶解曲线

相关实验:细胞因子检测

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serendipityDW82

请问各位大佬为啥我跑的pcr没有溶解曲线呀?

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6 个回答

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sswei

有帮助

可能由于引物没有把目的片段pcr出来。

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z流沙z

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首先程序上是否正确设置了溶解曲线。其次是否正确添加Rox。最后有一些基因没到平台期,可以增加模板上样量。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

可能是引物没有设计好,建议更换引物

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loveliufudan

有帮助

可能有以下原因:

低浓度的样本:如果你的模板 DNA 或 cDNA 浓度很低,那么可能无法检测到信号,因此没有观察到溶解曲线。建议在实验中使用较高浓度的样本。

没有模板 DNA:在 PCR 试剂盒中加入反应缓冲液和引物,但没有加入模板 DNA 或 cDNA,则不会观察到溶解曲线。

引物的浓度过高或过低:如果引物的浓度过高或过低,可能会影响 PCR 反应的灵敏度和特异性。建议按照建议的浓度使用引物。

PCR 反应条件不合适:如果 PCR 反应条件不正确,如温度不够高或时间不够长等,可能会导致 PCR 反应失败,从而无法观察到溶解曲线。建议检查 PCR 反应条件并进行优化。

荧光信号过低:如果荧光信号太低,可能会导致无法观察到溶解曲线。可以尝试使用更高灵敏度的仪器或增加荧光染料的浓度来增加信号。

需要注意的是,有些 PCR 试剂盒可能并不会产生明显的溶解曲线,具体需要根据试剂盒的说明进行判断。

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Dr_劉医生

有帮助

可能有以下原因:

  1. PCR参数设置错误:在设计循环参数时没有设置荧光信号采集;
  2. 模板降解:避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况;
  3. 引物或者探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性;


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balalaLy

有帮助

应该是你跑之前设置程序的时候没有设置

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