各位大佬，胫骨怎么提取rna啊。

可以借鉴以下步骤和方法：

小白鼠6只，雄性，4周龄，体重20-30 g。采用脱颈法处死，迅速解剖剥离双侧胫骨组织，用生理盐水冲洗干净，放于液氮中保存。

1.骨RNA提取

第一组(对照组):随机称取25 g的骨组织3份，在标准条件下用传统Trizol法一步裂解，氯仿纯化、异丙醇沉淀、乙醇再纯化，干燥后得到3份RNA沉淀，每份加入10uL DEPC水溶解。第二组(改良组):随机称取25g的骨组织3份放入2mlEP管中，每份加入300 uL的TRIzO l浸泡5 min后，加入150 uL水饱和酚电动研磨成组织匀浆;每管补加700 uL的TRIzol和300 uL水饱和酚，涡旋充分混合，静置10 min后分三层;吸取上清液转入含有滤膜的2 mLEP管中，4℃離心13500转15 min;取上清液，加入500 uL氯仿，再次重复涡旋静置离心;取上清液按1:0.75:0.25的比例加入异丙醇和钠盐，同上涡旋静置离心;弃上清，沉淀加入75%的乙醇800 uL，同上涡旋静置离心;弃上清，沉淀加入10 uL的1 ‰DEPC水溶解。

2.RNA样品浓度、纯度及完整性检测

两组RNA 样品分别用NANODrop2000c型紫外分光光度计测定核酸的浓度C(ug/ml)，和 纯度(A260/A280值)。用1 %非变性琼

脂糖凝胶，在电压110V，30min 电泳，观察

RNA 的 28S、18S条带是否清晰，判断 RNA的完整性及有无 DNA污染。

胫骨是硬骨组织，其RNA含量较低，提取RNA的难度较大。以下是一些可能有用的提示，希望能帮助您解决问题：

样本处理：在提取RNA之前，可以尝试将样本彻底粉碎或切碎，以增加细胞破碎和RNA的释放。使用切割机或高压均质器等设备，将样本尽可能地粉碎或切碎。

组织破碎：使用合适的样本破碎方法和缓冲液，如细胞裂解缓冲液、 TRIzol 等。特别是对于硬骨组织，需要先用力器械将骨头打碎，然后用 TRIzol 等缓冲液彻底破坏细胞膜和细胞核膜，以促进 RNA 的释放。

RNA 提取方法：可以使用商业化的 RNA 提取试剂盒，比如 Trizol，RNeasy 等等。在使用试剂盒时需要注意，不同试剂盒的提取方案可能略有不同，需要按照说明书进行操作。此外，可以考虑尝试使用 RNA 纯化柱等纯化手段进一步提高 RNA 的纯度。

RNA 的检测：使用紫外分光光度计等设备检测 RNA 的浓度和纯度。如果 RNA 的浓度较低，可以尝试使用全基因组扩增和RNA增强等技术增加RNA的量。

反转录：根据 RNA 的数量和质量进行反转录。如果 RNA 含量较低，可以尝试使用增强反转录试剂盒，这些试剂盒可以增加 RNA 的复制数量。

这个rna的量不够，需要增加提取的rna量，可以增加样品

首先将模板RNA在冰上解冻，斡旋振荡混匀，瞬时离心后，选用nanodrop进行RNA浓度测定。

打开电脑后，打开nanodrop软件--点击“Nucleic acid”--选择“OK”--选择“RNA”。

先用1ul灭菌dd H2O清洗3遍，擦干。

加入样品测定后，记录数据，包括RNA浓度（<1000ng/μL）、260/280。

灭菌dd H2O清洗2-3遍，擦干。

打开电脑后，打开nanodrop软件--点击“Nucleic acid”--选择“OK”--选择“RNA”。

先用1ul灭菌dd H2O清洗3遍，擦干。

加入样品测定后，记录数据，包括RNA浓度（<1000ng/μL）、260/280。

灭菌dd H2O清洗2-3遍，擦干。

一般来说230nm代表有机物水平(碳水化合物)，260nm代表RNA 水平，280nm代表蛋白水平，260/230 表示有机物量，260/280代表RNA提取量。

除逆转录试剂以外所有试剂可在室温解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前斡旋振荡混匀，瞬时离心。反应体系在冰上进行。计算逆转录量，如1ug.按照如下体系将各试剂加入，混匀，瞬时离心。以上操作步骤在冰上进行。为了保证反应液配制的准确性，进行各项反应时，应先配制成总体系混合液，然后再分装到每个反应管中。

将反应液进行PCR反应程序为：

25℃，10分钟。50℃，15分钟。85℃，5分钟。10℃，Hold down。

将得到的cDNA补超纯水至100ul。由于逆转录后的样品为cDNA,相对于RNA来说稳定性较高，可以将其保存于负20度。