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分子生物学实验

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

介绍了一种受磷酸耗调节的能有效介导反转录载体质粒D N A 进入细胞的反转录病毒包装系统的转染方法。介绍了基于P C R 技术检测 B 细胞发育过程中的同型转换。用P C R 检测稀有 m R N A ,分别为 P C R 对 人 或 小 鼠 的 T C R 可变区基因进行定性和定量,通 过 P C R 产物克隆和测序来研究表达基因的连接多样性。提供了 R N A 酶保护实验方案, R N A 酶保护分析是一种敏感和定性的方法 ,检 测 8〜1 2 种基因 的 相 对 转 录 水 平。
作者:J.E.科利根等,译者:曹雪涛等,本实验来自「精编免疫学实验指南」

来源:丁香实验

操作方法

293T 细 胞 包 装 和 扩 增 反 转 录 病 毒

基 本 方 案 1 磷酸钥/DNA 沉 淀瞬时转染 Phoenix 反转录包裝细胞 ​

免 疫 球 蛋 白 融 合 蛋 白 的 构 建

基 本 方 案 1 免疫球蛋白融合蛋白的构建 材 料 编码靶基因的 D N A ​

单 链 抗 体 的 噬 菌 体 展 示 技 术

基 本 方 案 1 全套单链抗体噬菌体载体的构建 材 料 新鲜分离的小鼠脾脏或者 IO7 杂 交 瘤 细 胞(单 元 undefined3) R N A 提取试剂 R T -P C R 试剂 D E P C 水 寡 核 苷 酸 引 物(表 14. 3.1) DNA marker 琼脂糖胶回收试剂盒(Qiaquick Gel E

整 体 培 养 中 同 型 转 换 重 排 的 PCR 检测

基 本 方 案 1 通过转换接头的直接 PCR 材 料(带 V 项 目 见 附 录 1) 外周血分离的单核细胞(P B M C ; 单 元 8.1) I M D M -I O 完全培养基 重组人 IL-4 (rfIL-4; 表 5. 0 •1) ​

PCR 检 测 细 胞 因 子 m R N A 的表达

基 本 方 案 定 量 IL -2 mRNA表达水平材 料内参照:转 录 质 粒 载 体(含有临床生物检测标本相关的c D N A )胍盐溶液50 U/ul RNasin5 X 反转录酶缓冲液0.5m g / m l olig (d T )16l m g /m l 乙酰化的B S A4d N T P 混合液200U /ul M o - M u L V 反转录酶1 〇 X 无 M g C l 2 P

P C R 检 测 人 T 细 胞 受 体 基 因 的 表 达

基 本 方 案 PCR检 测 人 T 细胞受体基因的表达 ​

P C R 检 测 小 鼠 T 细 胞 受 体 表 达

基本方案 I P C R 分析小鼠 T C R 基因表达 材 料 正常小鼠的组织匀浆或者 是 H B S S 制备的单个细胞悬液(IO4〜IO7) (附 录 1) 无菌水 ​

多探针核糖核酸酶保护试验同时测定 mRNA 表达

基 本 方 案 多 探 针 核 糖 核 酸 酶 保 护 试 验 材 料 R i b o Q u a n t 体 外 转 录 试 剂(B D Pharmingen) 包含下面: 40U /ul RNasin G A C U 库(2.75m m o l / L G T P /2.75m m o l / L A T P / 2.75m m o l / L

端 粒 长 度 和 端 粒 酶 活 性 的 分 析

基 本 方 案 I Southern 杂 交 检 测 传 统 凝 胶 电 泳 中 末 端 端 粒 D N A 限制性片段(TRF) 的端粒长度 材 料 基 因 组 D N A (试剂盒分离) 和 限 制 性 内 切 核 酸 酶 和 反 应 缓 冲 液 琼 脂 糖(D N A 级) 1 〇 X T B E 或 T A E 6 X D N

T C R 库 的 抗 原 谱 / 免 疫 扫 描 技 术 分 析

基 本 方 案 1 人 和 小 鼠TCR受体库多样性的免疫扫描技术分析材 料

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