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一个抗体做WB和IP没问题,条带很强,但是IHC没信号。而且我做IHC时同步做了另一个抗体的,信号很强,可能的原因是什么呢?

相关实验:免疫荧光技术

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Miracle星

一个抗体做WB和IP没问题,条带很强,但是IHC没信号。而且我做IHC时同步做了另一个抗体的,信号很强,可能的原因是什么呢?

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4 个回答

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sswei

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无信号-阴性结果

1、真阴性结果:组织或细胞不表达抗原,无法检测到相应信号;或抗原表达量太低,无法检测到相关信号。

2、假阴性结果

(1)免疫组化染色前错误:切片时选错蜡块和拿错切片,这种情况可用H&E染色验证。

(2)免疫组化染色操作错误:

①确认是否忽略了应加的某种试剂,包括一抗抗、底物等。

②确认所有的试剂是否按正确的顺序加入,是否在足够的温度条件下解音了足够的时间。

③复查抗体的标签确认是否使用了正确的抗体,以及所用的检测系统是否和一抗四配。

④检查抗体的有效期和保存条件,尤其是标记了酶或荧光素的抗体。

⑤检查抗体稀释度及所使用的抗体稀释液是否合适。

⑥确定组织或细胞标本的储存条件。

⑦检香底物溶液,最简单的检测方法是将一滴标记有的抗体加入到制备好的底物溶液中,如果底物发生预期的颜色变化,则可排除底物的因意。需要注意的是,有些底物在制成工作液后应在一定时间内用完,否则会失效。

⑧检查冲洗液是否和反应试剂匹配,冲洗液的pH值也很重要,与过氧化物酶底物四配的溶液中不应含有叠氮钠。

⑨检查复染剂、脱水、透明和封片剂是否和所使用的色原匹配。荧光素染色封片要选用水溶性封片剂,AEC,APRed/FastRed和其它水溶性染料不能用二甲苯有机溶剂透明。

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毛利小五郎的徒弟

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抗体的问题,考虑是抗体对两种样品的特异性差异造成的

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balalaLy

有帮助

看一下说明书,有些抗体就是只能做wb和IP

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loveliufudan

有帮助

这种情况可能是由于以下几个原因导致的:

抗体与IHC条件不兼容:不同的实验条件可能会影响抗体的特异性和亲和力。可能抗体与IHC条件不兼容,导致在IHC实验中没有产生特异性的信号。

抗体与标本不兼容:IHC使用的标本和WB、IP等不同,可能会影响抗体的特异性和亲和力。抗体与IHC所使用的标本不兼容,也可能导致在IHC实验中没有产生特异性的信号。

抗体批次问题:不同批次的抗体可能具有不同的性能,可能会导致IHC实验中没有产生特异性的信号。

抗体浓度问题:抗体的浓度可能会影响其特异性和亲和力,如果在IHC实验中使用的抗体浓度过低,可能导致没有产生特异性的信号。

其他实验步骤问题:IHC实验包含多个步骤,如抗原修复、脱水、染色等。如果实验步骤不正确或者出现问题,也可能会导致IHC实验中没有产生特异性的信号。

综上所述,需要仔细检查实验条件、抗体批次、抗体浓度以及其他实验步骤,找出导致IHC实验中没有产生特异性的信号的原因。

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