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【求助】做western时,非特异性条带信号很强,但B-actin信号很弱!

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我是一个新手, western前后做了两次,均是在130-150之间出现信号很强的非特异性条带,另有少许杂带,而B-actin处信号很弱(原则上说,应在膜的中下近1/3处出现特异性条带),但却几乎看不出来(下图所示),请高手指点,不胜感激!

上样量一样吗?
aids610610 wrote:
上样量一样吗?
上样体积均是20ul,蛋白定量均是45ug.每次上样之前均先在沸水中煮了5min,同一瓶抗体,师姐做出来了,不过有杂带!我们俩的各个步骤的设置条件差不多!
请问:煮沸后离心的具体目的是什么?有时间与速度的具体要求吗?还是只需快速离心即可??!!谢谢!
因原因不明,我今天从组织匀浆起重新做了一次,明天显影,再看一下结果如何!!
之前用的是注射器,抽取样品位置不对,所以出现杂带!这次采用老师的意见,换用移液枪上的样,(个人为比较期间,两空仍用注射器)差别很明显,用移液枪的杂带没有了!!很开心! 个人总结:western该注意的事项很多。都做到了,结果应该没问题!

本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

师兄微信号:shixiongcoming

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