请问悬浮细胞（例如真菌的原生质体）应该怎么保持固定不被pbs冲洗掉？

悬浮细胞可以用琼脂糖进行包埋固定，这样pbs多次冲洗都不影响。

采用多聚甲醛固定法进行固定：

A.PBS 配制 4% 多聚甲醛。

B. 用 PBS 洗涤细胞 2 次，200 g 离心 5 分钟；重悬细胞。

C. 用 4% 多聚甲醛溶液悬浮细胞，细胞浓度约为 1x106/ml，室温下静置 15 分钟, 不时摇动。

D. 200 g 离心 5 分钟，用 PBS 重悬细胞，重复洗涤细胞 2 次；

E. 用含 0.2% TritonX-100 或 NP-40 的 PBS 溶液透化细胞 2 分钟（室温下），有的抗原需 15 分钟，具体时间视具体抗原而定。

F. 200 g 离心 5 分钟，用 PBS 重悬细胞，重复洗涤细胞 2 次。

要保持悬浮细胞固定，可以使用适当的固定剂，例如甲醛或乙醛。将细胞悬浮于含有适当浓度固定剂的缓冲液中，通常需要10-15分钟的时间，以确保细胞完全固定。固定后，可以用PBS洗涤细胞以去除固定剂和其他污染物，但需要注意不要用过于强烈的喷射力，以免冲洗掉细胞。另外，固定过程中也需要注意避免机械震荡或剧烈摇动，以免造成细胞破裂或变形。