细胞免疫实验测定蛋白质定位

有3种方法可以测定蛋白质定位：1、免疫结合法2、同位素跟踪法3、探针法

1、利用免疫电镜技术在超微结构水平上研究特异蛋白抗原的定位。

2、采用荧光素标记的已知抗体(或抗原)作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原(或抗

体)，形成的抗原抗体复合物带有荧光素，在荧光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素发出明亮的荧光，这样就可以分辨出抗原(或抗体)的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量，以达到对抗原物质定

位、定性和定量测定的目的。

要确定细胞中特定蛋白质的定位，需要使用特异性的一抗（针对目标蛋白质）和荧光标记的二抗（针对一抗），以及荧光显微镜。

细胞免疫荧光染色实验步骤中最需要注意的是：

细胞片制备：要保证细胞片干净、完整、均匀，避免污染和损伤。

固定及通透：要选择合适的固定剂和通透剂，根据目标蛋白质的性质和位置调节固定时间和浓度，避免过度或不足固定。

封闭：要使用合适的封闭液，如BSA或正常血清，防止非特异性结合或高背景信号。

抗体孵育：要选择合适的抗体种类、来源、浓度、孵育时间和温度，避免交叉反应或弱信号。

荧光检测：要选择合适的荧光染料、激发波长、滤镜组合、曝光时间等参数，避免漂白或过曝。

定位可以做免疫荧光和电镜分析。