求助：小鼠脾脏淋巴细胞的培养

小鼠的脾脏淋巴细胞是贴壁生长的，在胎牛血清中加入白介素培养基，或者直接把悬浮培养。

具体可参考

小鼠脾脏B淋巴细胞纯化培养方法的建立.

这篇文章

这篇文献里的方法里讲的很清楚，关于小鼠脾脏淋巴细胞的培养“小鼠脾脏淋巴细胞体外培养前后细胞表面标记物CD3、CD4、CD44、CD62L 的变化”

方法:

小鼠牌细胞体外培养，分组及免疫刺激:小鼠脱白处死，在体积分数75%的乙醇中浸泡1min，无菌操作取出脾脏制成单细胞悬液114，离心洗涤后培养于24孔板内，随机分成7组，依次为白细胞介素4组、CD3组、脂多糖组以及白细胞介素4+CD3组、白细胞介素4+脂多糖组、CD3+脂多糖组、对照组，每组3个复孔，细胞以6.0x10°L浓度悬浮于RMPI培养基中，分别加入白细胞介素4(20ug/L)、 CD3单克隆抗体(5mg/L)、脂多糖(100ug/L)及白细胞介素4+CD3 白细胞介素4+脂多糖、CD3+脂多糖刺激细胞，将未给予刺激的脾细胞作为对照组，置于37℃，体积分数5%CO2的培养箱中培养。培养期间，每隔一两天取细胞进行流式检测，并加入等体积的培养基和刺激因子继续培养。

流式细胞仪检测淋巴细胞及其亚群:每组取相同体积的细胞，PBS洗涤，400g/min离心5min，弃上清，加入抗 CD19抗体(FITC标记)、抗CD3抗体(PE标记)、抗CD4抗体(PE-Cy5标记)和抗lgD抗体(APC标记)，浓度均为10mg/L，混合均匀，4℃下避光30min，PBS洗涤2次后，弃上清细胞悬浮于100uLPBS中上机检测。送检样本次数5次。采用BDC6流式细胞仪获取数据，并用FlowJo软件分析流式细胞仪数据，结果利用平均荧光强度划分细胞群，再计算出各亚群细胞数量和百分比。