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流式细胞术实验中,荧光弱常见原因是什么?怎么解决?

相关实验:基于荧光共振能量转移的 HIV-1 病毒的融合分析实验

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凌云38729

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3 个回答

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明査日月

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前带现象 抗体稀释过度 细胞数量过多 抗原本身表达弱

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小小小小小芳

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1.荧光弱可能是由于抗体过度稀释。因此使用前通过正确滴定抗体,以确保抗体浓度适当。

2.直标时,荧光弱也可能是由于前带现象引起(概念见表格后解释),因此,小心正确滴定抗体很有必要。

3.荧光弱可能由于细胞数量过多。建议正确调整细胞密度,一般低于1×10E7/ml。

4.荧光弱可能是由于抗原本身就表达低,可通过查阅文献,明确抗原表达水平。

5.如果查阅到该抗原确实本身表达弱,那么建议选择更亮的荧光素。

6.在交叉反应明显的抗体中,其荧光强度弱于特异性高的单克隆抗体。

7.一抗或二抗的孵育时间和温度均需优化。 散射光异常

8.确保细胞是新鲜收集的,否则容易出现大量死细胞和碎片。

9.对细胞进行刺激、活化时,可影响细胞散射光特性。

10.如果要裂解红细胞,确保裂解液新鲜配制并且配制正确。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

●可能是由多种原因引起的:检查曝光时间和强度;改变固定或孵育时间;确保抗体/同型的兼容性;测试抗体稀释范围和样品浓度;保证正确的试剂和载玻片的制备和储存方法;检查设备不兼容性。

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