流式细胞术实验中，荧光弱常见原因是什么？怎么解决？

前带现象 抗体稀释过度 细胞数量过多 抗原本身表达弱

1．荧光弱可能是由于抗体过度稀释。因此使用前通过正确滴定抗体，以确保抗体浓度适当。

2．直标时，荧光弱也可能是由于前带现象引起（概念见表格后解释），因此，小心正确滴定抗体很有必要。

3．荧光弱可能由于细胞数量过多。建议正确调整细胞密度，一般低于1×10E7/ml。

4．荧光弱可能是由于抗原本身就表达低，可通过查阅文献，明确抗原表达水平。

5．如果查阅到该抗原确实本身表达弱，那么建议选择更亮的荧光素。

6．在交叉反应明显的抗体中，其荧光强度弱于特异性高的单克隆抗体。

7．一抗或二抗的孵育时间和温度均需优化。 散射光异常

8．确保细胞是新鲜收集的，否则容易出现大量死细胞和碎片。

9．对细胞进行刺激、活化时，可影响细胞散射光特性。

10．如果要裂解红细胞，确保裂解液新鲜配制并且配制正确。

●可能是由多种原因引起的：检查曝光时间和强度；改变固定或孵育时间；确保抗体/同型的兼容性；测试抗体稀释范围和样品浓度；保证正确的试剂和载玻片的制备和储存方法；检查设备不兼容性。