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做植物ChIP,用溶液二洗核时上清是透明的,但是沉淀还是绿油油的,感觉洗不掉,为什么?

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yangyang214

  • 就是用磨样之后加buffer1,用细胞过滤器过滤,离心,之后用buffer2洗涤,洗了很多次,但是后来上清已经是无色的,下面仍然是绿的,感觉是怎么都洗不干净的样子。
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4 个回答

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yu脚踏实地

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细胞破碎不完全,破碎不充分,细胞质没出来,然后不行

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yangyang214user-title

我一开始也是这么怀疑的,因为是茶叶,叶质比较硬厚,所以宁愿损耗多一些,就用了最小孔径的细胞过滤器过滤的,希望把没磨好的组织都过滤掉。

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灵枢天问

有帮助

可能是研磨不够充分,你的buffer1.2都是试剂盒里的还是自己配的,如果是自己配的可以适当提高buffer1的用量

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yangyang214user-title

自己配的,buffer1就是磷酸钾,NaCl,己二醇,巯基乙醇,buffer2就比buffer1多了0.5%Triton100,氯化镁

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Dr_劉医生

有帮助

有沉淀可能是因为转录因子的浓度太低,做植物chip-seq本来就表达量不高,可以提高浓度试试,然后再洗

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yangyang214user-title

提取细胞核的过程中叶绿体洗不干净,这和转录因子没关系吧…

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汤姆卜丽波

有帮助

是不是细胞破碎不充分,染色质出不来

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yangyang214user-title

还没有到出染色质那一步,就是提核的过程中洗去体和叶绿素的过程,去污剂用的0.5 %triton100,刚开始还能洗下一些,后来上清已经变清澈了,但是下面沉淀依然很绿,将Triton提高到1%,也没什么改进。模样时用研磨仪磨的,之后还用46微米的细胞过滤器过滤了,理论上也不至于有大的组织块了。就是感觉洗不动了。

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