在做免疫荧光实验时，怎么消除背景荧光？

尽可能冰冻切片吧，然后每次清洗都要有三次，做好阴性对照，只加二抗那一组。

严格去除切片上的石蜡残留 所有石蜡切片在染色前都需要通过二甲苯去除石蜡。

适当延长血清封闭的时间至2h。可以考虑采用37℃孵育箱进行封闭,优化封闭时间,充分去除组织中的类属抗原。

封闭时间可以适当延长，二抗浓度不要太高，设置阴性对照

通过充分的预实验来摸索二抗孵育时间和温度。二抗孵育时间过久，切片的自发荧光会很强，不容易洗掉。

如果在荧光二抗孵育的步骤停留过久，而未经过充分漂洗，肯定会有较多的荧光二抗残留在组织切片上。因此，在适宜的二抗浓度下，充分的漂洗会极大减少自发荧光。

这种情况下可以选择将 组织切片变薄试试，也可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间 。

可以试一试用冷PBS缓冲液冲洗

降低抗体浓度，缩短染色时间，避免非特异性结合。

在抗体孵育前进行封闭可以降低抗体非特异性结合，从而降低背景荧光。

使用含DAPI的封片剂，不仅可以染核，还有防止荧光淬灭的成分。

这种情况可以试试降低二抗浓度。