共聚焦40倍镜看dapi 整个细胞蓝色一片 没明显细胞核染色效果。目的蛋白是膜蛋白二抗是红色，也是红色一片没明显细胞膜结构，为什

是不是看错了，一点都没有么，如果有一点，那就是没染好

dapi是很难出问题的，连dapi都这样，那估计不是染料的问题，共聚焦物镜镜头有没有沾上镜油，或者焦距有没有调好

做DAPI对活细胞的染色效果不是很好，需要先固定，再染色。用甲醇和丙酮1：1的混合液固定效果不错，还有六孔板加DAPI100ul ，不容易覆盖底部，因为六孔板的的不中央是高一点的，所以我觉的量是个问题，固定时间可以适当加长到十至十五分钟。至于你重新加入培养液，我觉的没有什么必要，只要保持湿润就行了，以防染料干燥，影响观察。至于你说的蓝色，可能是自发荧光的干扰。我们平时用的荧光显微镜，基本是直接选取蓝光或绿光进行的。

要么是你细胞层没有找对，要么就是没有染上，然后全部都是背景色