流式细胞术如何进行荧光补偿？

使用标准微珠确保细胞仪的性能符合规格。

利用未染色的样品设置荧光通道电压。调节前向和侧向散射光，以便清楚界定细胞群。在后续分析中，死细胞、细胞团以及细胞碎片应被排除。

应尽可能避免使用发射光谱重叠程度较高的某些荧光染料组合（例如，APC 和 PE-Cy5）。各荧光染料都需要补偿对照，并且应包含阳性和阴性细胞群。设置补偿时应单独使用补偿对照。

阳性细胞群的亮度应至少与实验中包含的其他细胞的亮度相当，并且应占所有细胞群的 10%。染色前，阳性细胞群的自发荧光应与阴性对照一样。理想情况下，对照样品中的阳性和阴性细胞群应为同类型细胞。如果无法实现，请考虑使用荧光补偿微珠。

或者，也可以使用不同类型的细胞作为补偿对照，前提是其能够表达目标标记物。如果对照细胞中的目标标记物含量极低或不存在，则可使用靶向更常见标记物的其他抗体，但需携带相同的荧光染料。由于化学偶联的差异，串联染料（例如，PE-Cy5）可能会导致更多问题。建议使用同一批次的串联染料。

通常，补偿设置从处于光谱的远红端（更高的波长）的荧光染料开始，逐步往下到那些处于光谱的低端的荧光染料。务必检查所有通道的补偿情况。

虽然大部分重叠会出现在峰值发射的高波长一侧，但根据光谱发射曲线的形状，部分溢出/重叠可能出现在相反方向，即峰值发射的低波长一侧。使用的荧光染料数越多，这个问题就越严重。如果阴性细胞群中存在更宽范围的荧光强度，补偿会更困难，检测灵敏度也会降低。

溢出通道中阴性细胞群的中值等于阳性细胞群的中值时，补偿设置正确。例如，如果将 FITC 染色的阳性样品用于补偿 PE 通道，阴性和 FITC 阳性细胞群的中值应与 PE 通道相同。出现 FITC 泄漏的所有通道都应进行补偿。

补偿水平可在线（手动或通过软件“向导”）或离线设置。无论何种情况，都应保存单色对照设置，以用于采集后补偿或进行调节。

这个要看你用的什么机器，如果是c6的话，没法调补偿，如果是别的高级的机器的话，直接找管机器的老师帮忙，别自己上来就自己调。

通过调节电压来修正荧光渗漏的过程从探测器除去除匹配荧光以外的任何荧光信号。