western blot 内参

可能你用的内参是多抗而不是单抗的原因

是不是抗体浓度过高或者封闭不完全导致的

有很多蛋白酶可以降解actin，使原本42KDa的actin变成更短的片段， 40-41 KDa、37 KDa、30-32KDa、10-15 KDa等。如果你在实验中发现actin的条带总是出现其他固定位置的条带，比如37 kDa、30 kDa等，很有可能就是酶的作用使actin发生了剪切。建议使用新鲜的组织或者健康的细胞进行重新制样，制样过程中充分抑制蛋白酶活性。选择抗体尽量选择N端单克隆抗体。

1.很多酶都可以降解actin，在各组织里和细胞里的分布比较广泛，在裂解过程中它们极有可能是降解actin的主要因素，因此需要设法 抑制蛋白酶活性，比如引入蛋白酶抑制剂、避开蛋白酶最适活性温度等；

2. 对于贴壁细胞，在传代过程中使用的胰酶也是一个潜在威胁，在传代的时候需要控制好消化时间，防止消化过度，尤其是在最后一次传代时，细胞密度尽量传低，以充份稀释残留的胰酶，同时提高未被降解的细胞的比例。

很有可能就是酶的作用使actin发生了剪切。建议使用新鲜的组织或者健康的细胞进行重新制样，制样过程中充分抑制蛋白酶活性。选择抗体尽量选择N端单克隆抗体

1.可能你的样品有降解。2.你胶配的不匀。3.转膜没转好，温度高，胶变形了4.你跑胶的buffer是否改了？