丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

跑出来的胶,杂带太多,怎么回事儿?目的条带都看不清,被杂带覆盖了。

相关实验:免疫沉淀

user-title

dxy_u7ff8bo

跑了无数次,跑着跑着就出来杂带了,是抗体的原因吗?

wx-share
分享

4 个回答

user-title

whilt-shirt

有帮助

可能是抗体浓度过高导致的,建议稀释抗体试试

user-title

Agias

有帮助

目的蛋白浓度太低量太少?优化前期实验,尽可能富集。

user-title

未来9

有帮助

可能的原因及建议:

①目的蛋白存在多个修饰位点(磷酸化位点、糖基化位点等等),本身可以出现多条带。查文献或生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,去除修蛋白饰后确定蛋白实际大小,这个需要一定的生物化学基础和生信分析能力。

②目的蛋白有其它剪切本,查阅文献或生物信息学分析其可能性。

③样本处理过程中目的蛋白发生降解,加入蛋白酶抑制剂;样本处理在冰上操作。

④上样量过高,过于敏感,适当减少上样量。

⑤一抗特异性不高,重新选择或制备高特异性的抗体。

⑥一抗不纯,纯化抗体。

⑦一抗或者二抗浓度偏高,适当降低抗体浓度。

user-title

天一湖医者

有帮助

不排除引物设计的问题,模板上和互补的序列很多引物

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序