whilt-shirt
可能是抗体浓度过高导致的,建议稀释抗体试试
Agias
目的蛋白浓度太低量太少?优化前期实验,尽可能富集。
未来9
可能的原因及建议:
①目的蛋白存在多个修饰位点(磷酸化位点、糖基化位点等等),本身可以出现多条带。查文献或生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,去除修蛋白饰后确定蛋白实际大小,这个需要一定的生物化学基础和生信分析能力。
②目的蛋白有其它剪切本,查阅文献或生物信息学分析其可能性。
③样本处理过程中目的蛋白发生降解,加入蛋白酶抑制剂;样本处理在冰上操作。
④上样量过高,过于敏感,适当减少上样量。
⑤一抗特异性不高,重新选择或制备高特异性的抗体。
⑥一抗不纯,纯化抗体。
⑦一抗或者二抗浓度偏高,适当降低抗体浓度。
天一湖医者
不排除引物设计的问题,模板上和互补的序列很多引物
相关产品推荐
相关问答