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ChIP实验中DNA的检测在什么情况下用PCR反应?什么情况下用测序?

相关实验:芯片技术

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迟C迟

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2 个回答

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dxywode

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ChIP实验中,当检测已知蛋白结合的DNA序列的时候,可以使用PCR反应进行检测,因为你可以根据已知的DNA序列,取设计引物,然后进行扩增,看能不能将DNA扩增出来。扩增出来了,就证明你成功的使用抗体将目的基因富集下来。当你不知道结合蛋白所对应的DNA序列时,就要通过构建文库以后,进行测序,然后知道富集下来的DNA序列。
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whilt-shirt

有帮助

当已知蛋白结合的DNA序列的时候,可以使用PCR反应进行检测,PCR可以使用End point PCR和Q-PCR方法,在PCR的时候除了样本组外,还需要设置input 对照,阴性对照和空白对照。PCR扩增片段长度200-400bp最佳,模板DNA片段过长,结合位点的邻近DNA会出现一定程度的信号富集。 但是有些情况下,蛋白结合的DNA序列是未知的,这时我们需要使用ChIP结合测序(Seq)方法检测,染色质免疫共沉淀测序(ChIP-Seq)一般包括3个步骤:染色质免疫共沉淀(ChIP)反应,文库构建和测序。一般有两种方法操作,一种使用普通ChIP试剂盒,获得纯化的DNA,然后交个测序公司,由公司进行文库构建和测序。还有一种叫做ChIP-Seq试剂盒,这种试剂盒一般包括ChIP反应和文库构建,仅需将构建好的文库交给公司进行测序即可。

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