什么情况下细胞必须进行流式分选

流式细胞分选技术原理：利用流式细胞分选仪，以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞（或微粒）的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术，它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单克隆分选，能复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离，单次可同时对其中一种到四种特定细胞进行超高速分选纯化、高通量单克隆分选或细胞芯片制备。分选后的细胞能直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR扩增或原位杂交等，可进一步进行细胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同细胞之间的差异化研究。实验中样本细胞丢弃的比例低于5%，保证样本中目标细胞的高回收率。

流式分选应用的领域

1、干细胞组织研究

2、疾病细胞如炎症细胞、肿瘤细胞等的发生、发展和转归研究

3、移植和细胞治疗研究等

比如在肿瘤医学研究中，流式分选急性髓系白血病，可以检测（AML)中某些细胞呈现侧群细胞的特性.且能逃离相关药物的控制，从而可能导致该疾病的复发。在再生医学研究中，流式分选人脂肪干细胞，其有成骨活性。

从上图A可以看出流式分选仪以CD105作为表面标志分选出阳性hADSCs细胞，其比例约占单核细胞50%；B流式细胞仪验证磁珠分选CD10undefinedhADSCs细胞纯度可达80%；C茜素红染色示成骨诱导后CD10undefinedhADSCs组钙结节表达；D茜素红染色示成骨诱导后未分选hADSCs组钙结节表达。

流式分选样本常规处理方法：

1、分选外周血，骨髓时：加抗凝剂，去红细胞

2、分选组织时，机械分离或胶原酶

3、培养细胞，使用胰酶消化

在实际细胞分离中给，因为流式分选的办法价格相对比较昂贵，实验者一般都会采取别的方法分离细胞。下面列出来几种其它细胞分离方法不能替代的情况，这些情况下必须进行流式的细胞分选：

1、要求目标细胞群有极高的纯度(95%-100%)；

2、需要分离低密度表面受体/抗原的细胞；（弱阳性细胞)

3、需要根据表面受体密度的差别来分离不同细胞；（根据免疫表型的分选，抗体亲和力进化等）

4、需要依据多色荧光标记来分选细胞；

5、根据某些细胞内部标志，如DNA含量、胞内抗原等分离细胞；

6、多孔板分选。如单克隆分选，在96孔板每个孔中精确的分选进1个细胞；

7、需要分选极低含量的细胞（如0.001%或更低）。流式可以分选出百万分之一的稀有细胞。