ELISA实验如何尽量避免假阴性和假阳性？

引起 ELISA 测定错误结果的原因主要有：

①标本因素（类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠 Ig (s) 抗体、交叉反应物质和其它物质等干扰）

②试剂因素（标本管中添加物质的影响）

③操作因素（标本溶血、标本受细菌污染、标本凝集不全、标本保存不当）

假阴性

①标本用肝素或EDTA等抗凝处理，易造成HBsAg检测结果假阴性。肝素抗凝血浆会增加OD值,可能与高浓度肝素具有强大的负电荷，能吸附酶标记物不易洗脱有关。EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中的辣根过氧化物酶活性，造成假阴性。

②采用双抗体夹心法测定抗原时，如果用一步法测定，而此时被测物浓度过高，则可能由于勾状效应导致检测结果为阴性。为避免这种情况可以对样本进行稀释，或者直接改用双抗体夹心两步法。

③样本内被测物的浓度较低，也易造成假阴性结果。比如某些疾病发展初期被检物浓度低于检测限。

④某些情况下，个别个体的基因突变也可能导致检测结果为假阴性。尤其是检测用抗体的结合位点在突变区的情况下，这种情况虽然极其罕见，但是也可能存在的。

假阳性：

假阳性的出现通常是样本中掺杂有同源或同工物质，例如类风湿因子、补体、交叉反应物质和其它物质等。

在ELISA检测中为了避免出现假阴性或假阳性，不仅要严格执行标准操作规程，还要对与标本相关的各因素进行分析，采用对应措施排除干扰物质的干扰作用，做到检测结果准确一致。

一般elisa实验是通过设置复孔来避免假阴性和假阳性，此外，elisa时的标准曲线也是有力的阴性对照和阳性对照。