探讨两种方法检测HBsAg假阳性和假阴性的影响因素

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目前HBsAg的检测方法很多，但是在临床实验室检测HBsAg的方法最常用的主要是金标法和酶联免疫吸附试验（ELISA）。常常会有患者及其他工作人员反映HBsAg检验结果与其他医疗单位不一致，为此常会发生医疗纠纷。因此，提高HBsAg检测的准确性，避免假阳性和假阴性所造成的不良社会影响，是我们临床检验工作者应该重视的问题。

        为了减少HBsAg检测出现假阳性和假阴性，我们有必要对这种现象的原因进行分析，在实际的检测工作中，造成HBsAg检测出现假阳性和假阴性主要受以下因素影响，分述如下：

        1、金标法假阴性原因

        1.1 检测时间短,金标法最适判读时间为15~30分钟,若时间太短就会发生一些弱阳性HBsAg标本出现假阴性。

 

 

        1.2 灵敏度较低，金标法>1ng/ml,而ELISA法<1ng/ml也能检出。

 

 

        1.3 层析过快，HBsAg-Ab1-Au还没来得及与Ab2结合就越过了检测线，这就可能造成假阴性结果。

        1.4 后带现象，即HBsAg的钩状效应。不管是ELISA法还是金标法，因反应原理均为“一步法”，所以当标本中HBsAg强阳性时两者均可出现后带现象，检验结果反而出现假阴性。

 

 

        1.5 个别标本可能存在HBsAg亚型差异而不易检出。

        2、金标法假阳性原因

 

 

        2.1 溶血或红细胞的标本，有时会在检测区出现一条颜色很浅的非特异型层析线，由于金标法主要是通过目视法判定结果，所以常会误认为假阳性，应该引起重视。

        2.2 为预防乙肝，部分HBsAg阴性人群在接种乙肝疫苗的1~2周内，血清中有时可检出HBsAg弱阳性，形成一过性HBsAg阳性，这可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg。建议接种乙肝疫苗后1个月内不应做HBsAg检测。笔者曾多次发现此类因为注射乙肝疫苗出现的假阳性问题，但用ELISA一步法检测仍为阴性即可消除上述干扰，其机理尚未十分清楚。

 

        2.3 汉坦病毒会造成HBsAg金标法检测假阳性，可能是汉坦病毒与HBsAg存在交叉性，易造成假阳性结果。

        3、ELISA法假阴性原因

 

        3.1 标本用肝素或EDTA等抗凝处理易造成HBsAg检测结果假阴性，肝素抗凝血浆会增加OD值,可能与高浓度肝素具有强大的负电荷,能吸附酶标记物不易洗脱有关；EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中的辣根过氧化物酶活性，造成假阴性。

 

        3.2 标本保存不当,在冰箱内保存过久的标本,血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体。标本放置时间延长（如一天以上），有时抗原或抗体免疫活性减弱，便出现假阴性。因此若采血后不能及时检测，5天内检测标本分离血清置于4。C冰箱内；超过5天不能检测的，应放在-20。C低温冰箱中。

        3.3 低浓度HBsAg标本（弱阳性HBsAg）易受加样时间（特别是大批量标本）、试剂平衡时间、溶血程度的影响，出现假阴性。如加样时间在30分钟内的差异是最大的。