ELISA中用到的试剂都是哪些?

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定，ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物。

1、包被缓冲液：0.05mol/L，PH9.6碳酸盐缓冲液（CBS）

Na2CO3 1.59g

NaHCO3 2.93g

加去离子水水至900ml，调pH值到9.6,定容到1000ml。121℃，0.1MPa高压灭菌20min后，室温贮藏。

2、磷酸盐缓冲溶液（1×PBS）：0.01 mol/L、pH7.4

NaCl 8.0g

KH2PO4 0.2g

KCl 0.2g

Na2HPO4·12H2O 2.9g

溶于900ml去离子水后，调节pH至7.4，定容到1000ml。121℃，0.1MPa高压灭菌20min后，室温贮藏。

3、10×PBS：0.2 mol/L、pH7.4

NaCl 8.0g

KH2PO4 2.4g

KCl 2.0g

Na2HPO4·12H2O 36.05g 或Na2HPO4 14.4g

溶于900ml去离子水后，调节pH至7.4，定容到1000ml。121℃，0.1MPa高压灭菌20min后，室温贮藏。

4、洗涤液：含0.05% Tween20的0.01 mol/L、pH7.4的磷酸盐缓冲液(PBST)。

5、封闭液：0.5% 聚乙烯醇、1%BSA、5%脱脂乳或1.5%的明胶，4℃贮藏。

6、酶标二抗溶液：用PBST适当稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记二抗。

7、底物溶液：TMB-H2O2-磷酸盐缓冲液

A液(0.1mol/L柠檬酸)：柠檬酸19.2g加去离子水至1000ml。121℃，0.1MPa高压灭菌20min后，室温贮藏。

B液(0.2mol/L Na2HPO4溶液)：Na2HPO4·12H2O 71.6g加去离子水至1000ml。121℃，0.1MPa高压灭菌20min后，室温贮藏。

10ml底物液，取A液2.43m1, B液2.57m1，去离子水5m1，加TMB 20mg充分混匀溶解。加入15μl 30%H2O2后，配好后立即使用。

8、终止液(2mol/L H2SO4)：把108.5ml浓硫酸缓缓加入891.5ml去离子水中，边加边不断搅拌，充分散热。

完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：
（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；
（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；
（3）酶的底物；
（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；
（5）酶联物（结合物）及标本的稀释液；
（6）洗涤液；
（7）酶反应终止液。

包被缓冲液：0.05mol/L

磷酸盐缓冲溶液（1×PBS）

临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；（5）酶联物（结合物）及标本的稀释液；（6）洗涤液；（7）酶反应终止液。1 免疫吸附剂 已包被抗原或抗体的固相载体在低温（2~8℃）干燥的条件下一般可保存6个月以上。有些不完整的试盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。 www