标记抗体的应用技术

一、用于检测未知抗原的双抗体夹心法 1. 包被 用0.05 M PH9 牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10 μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1 ml，4 ℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。 2. 加样 加一定稀释的待检样品0.1 ml于上述已包被之反应孔中，置37 ℃孵育1 小时。然后洗涤。（同时做

一、用于检测未知抗原的BA-ELISA 1. 包被抗体 用0.05 M PH9.6碳酸盐缓冲液将已知抗体作适当稀释，在每个聚苯乙烯酶标板的反应孔中加0.1 ml，4 ℃过夜（18-24小时）。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3 分钟（简称洗涤，下同）。 　　 2. 加样 加入待检样品（未知抗原）或作适当稀释的标准参考品于反应孔中，同时作空白孔，阴性和阳性孔对照。

一、辣根过氧化物酶免疫斑点试验 　　　　　　　 1. 将0.01 M PBS PH7.4 稀释的抗原液2 μl点于硝酸纤维素膜（或醋酸纤维素膜）上 　　　　　　　　　　　　　　　 2. 置37 ℃温箱中干燥20～30 分钟 　　　　　　　　　　　　　　　 3. 滴加封闭液37 ℃温盒中封闭10 分钟 　　　　　　　　　　　　　　　 4. 用洗涤液洗1～2

1. 包被抗体　 在每个小试管中加入聚苯乙烯珠各一枚，再加入300 μl用0.05 M，PH9.6 碳酸盐缓冲液稀释的抗HBsAg抗体，同时设空白对照，置4 ℃过夜。 　　 2. 洗涤　 用抽滤针头吸干管内液体，加入Tris-HCl-Tween20洗涤3 次，每次加2 ml，放置3～5 min，用抽滤针头吸干管内液体。 　　 3. 加待检血清和阳性标准品　 用PBS-Tw

1. 硅化规格相同的5 ml玻璃管，双蒸水冲净后烤干，每次实验分6～12组，每组5支试管 　　　　　　　　　　　　　　　　 2. 将125I标记抗体和非标记抗体分别用结合缓冲液作倍比稀释 　　　　　　　　　　　　　　 3. 在同一组5个试管中每管加入10 μl标记抗体，4、5管加入10 μl未标记抗体（浓度高于同组标记抗体100倍以上），1、2、3管补加10 μl结合缓冲液