免疫细胞培养的上清液除了用ELISA检测，还听说可以用mRNA检测手法，但是对于上清分泌的细胞因子如何收集，如何处理检测？

一般检测上清都是用ELISA方法检测啊，简单实用，结果重复性也还可以，没有必要用什么更高级的方法。

培养液浓缩用超滤好了，但是真核细胞表达量比较低，比较麻烦。

如果是分泌到培养基就要检测上清，如果是细胞质或者细胞核蛋白就可以裂解收集蛋白做western，而且这种细胞因子在你的细胞是组成型表达还是诱导型表达，如果是诱导型的当然要加诱导剂，如PGE2，就是要检测培养基，做ELISA吧

最近也在做相关的实验，测细胞因子的表达可以用qPCR的方法，收细胞提RNA，加感兴趣的细胞因子qPCR引物做荧光定量PCR，这应该是看细胞因子的mRNA表达水平。蛋白水平还可以用流式的方法，细胞培养加入刺激剂（如T细胞，加anti CD3/28刺激），再加蛋白转运抑制剂（商品化的golgi stop），这样分泌细胞因子就在细胞内，直接收细胞做胞内染色，上流式检测表达量。希望能帮到你。

蛋白纯化很多都是层析或者电泳。

测表达用western更好些，可以指示出蛋白的大小，判断表达是否正常，有否降解等等。ELISA数据波动太太。浓缩可以真空抽滤，更简便的是用超滤管，Millipore有这类产品，依据目的蛋白大小可选择10k、30k和50k等不同类型，一次过滤体积有4ml、15ml等等，浓缩后体积约100ul左右。我使用过，效果很好，可以考虑使用。