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免疫细胞培养的上清液除了用ELISA检测,还听说可以用mRNA检测手法,但是对于上清分泌的细胞因子如何收集,如何处理检测?

相关实验:Th细胞表位的鉴定

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细胞密度大概是多少呢?

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5 个回答

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lzy必有我师

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一般检测上清都是用ELISA方法检测啊,简单实用,结果重复性也还可以,没有必要用什么更高级的方法。

培养液浓缩用超滤好了,但是真核细胞表达量比较低,比较麻烦。

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dxywode

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如果是分泌到培养基就要检测上清,如果是细胞质或者细胞核蛋白就可以裂解收集蛋白做western,而且这种细胞因子在你的细胞是组成型表达还是诱导型表达,如果是诱导型的当然要加诱导剂,如PGE2,就是要检测培养基,做ELISA吧

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dxy_c280as65

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最近也在做相关的实验,测细胞因子的表达可以用qPCR的方法,收细胞提RNA,加感兴趣的细胞因子qPCR引物做荧光定量PCR,这应该是看细胞因子的mRNA表达水平。蛋白水平还可以用流式的方法,细胞培养加入刺激剂(如T细胞,加anti CD3/28刺激),再加蛋白转运抑制剂(商品化的golgi stop),这样分泌细胞因子就在细胞内,直接收细胞做胞内染色,上流式检测表达量。希望能帮到你。

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dxy_gwrp7ndq

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蛋白纯化很多都是层析或者电泳。

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小布丁瑶瑶

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测表达用western更好些,可以指示出蛋白的大小,判断表达是否正常,有否降解等等。ELISA数据波动太太。浓缩可以真空抽滤,更简便的是用超滤管,Millipore有这类产品,依据目的蛋白大小可选择10k、30k和50k等不同类型,一次过滤体积有4ml、15ml等等,浓缩后体积约100ul左右。我使用过,效果很好,可以考虑使用。

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